內容簡介
全書分上、下篇和附錄。上篇為生物化學實驗原理，共十四章，對生物分子的分離純化、含量測定和純度分析作了較全面扼要的介紹，並著重論述各種層析技術、離心技術、膜分離技術、電泳技術等常用系列化實驗方法的基本原理。下篇為生物化學實驗，共選編了45個實驗，包括糖類、脂類、維生素、蛋白質、酶、核酸等生生物化物質的分離製備與分析鑑定方法，如紙層析、薄層析、離子交換層析、凝膠層析、疏水層析、親和層析、金屬螯合層析、各種電泳和免疫技術，以及紫外-可見吸收光譜測定法等。其中既保留了一些對加強學生基本實驗方法和技能訓練行之有效的傳統實驗，也引進了一些較新的生化實驗技術。大多數實驗可以在6-12學時內完成，有些實驗可以組合成一個綜合實驗，也可以各自獨立作為一個實驗，便於安排教學。每個實驗後附有思考題和參考資料。附錄包括各種常用數據表，供讀者查閱。
本書可供綜合性大學、師範、醫藥和農林院校生物化學及相關專業的本科生作為實驗課教材，也可供相關教師和科研人員參考。
目錄
《生物化學實驗原理和方法(第二版)》
上篇 生物化學實驗原理
第一章 生物大分子的分離純化
第一節 概述
第二節 生物原料的選擇和預處理
第三節 生物組織與細胞的破碎
第四節 生物大分子的提取
第五節 生物大分子的分離純化
第六節 生物大分子活性物質的濃縮
第七節 生物大分子的結晶
第八節 生物大分子活性物質的乾燥
第二章 生物大分子活性物質含量和純度的分析方法
第一節 蛋白質含量的測定
第二節 粘多糖的定量及生物活性測定
第三節 核酸含量的測定
第四節 生物大分子純度的鑑定
第三章 層析技術
第一節 層析技術分類
第二節 液相層析法的基本原理
第三節 柱層析系統基本操作方法
.第四章 吸附層析法
第一節 基本原理
第二節 影響吸附的因素
第三節 吸附柱層析法
第五章 紙層析法
第一節 紙層析基本原理
第二節 影響rf的主要因素
第三節 紙層析實驗技術
第六章 薄層層析法
第一節 薄層層析原理
第二節 薄層層析的特點
第三節 吸附劑的性質與選擇
第四節 薄層層析實驗技術
第五節 薄層層析的定性分析
第六節 薄層層析的定量分析
第七節 薄層層析法的近代發展
第七章 離子交換層析法
第一節 基本原理
第二節 離子交換層析介質
第三節 離子交換樹脂
第四節 離子交換纖維素
第五節 葡聚糖凝膠離子交換劑及瓊脂糖凝膠離子交換劑
第六節 離子交換層析實驗技術
第七節 離子交換層析法的套用
第八章 凝膠層析法
第一節 引言
第二節 基本原理
第三節 凝膠的條件和類型
第四節 凝膠層析實驗技術
第五節 影響凝膠層析的主要因素
第九章 親和層析法
第一節 基本原理
第二節 配基和載體的選擇
第三節 親和吸附劑的製備方法
第四節 親和層析實驗技術
第五節 親和層析套用舉例
第六節 金屬螯合親和層析
第十章 疏水層析法
第一節 疏水層析原理
第二節 疏水層析的分離機理
第三節 影響疏水層析分離的因素
第十一章 電泳技術
第一節 電泳基本原理
第二節 電泳的分類
第三節 醋酸纖維素薄膜電泳
第四節 瓊脂糖凝膠電泳
第五節 聚丙烯醯胺凝膠電泳
第六節 染色方法
第七節 聚丙烯醯胺凝膠電泳過程中異常現象產生的原因及解決辦法
第八節 毛細管電泳
第十二章 離心技術
第一節 離心的基本理論
第二節 離心的基本方法
第三節 離心機的安全操作與保養
第十三章 膜分離技術
第一節 過濾技術
第二節 半透膜分離技術
第三節 超濾技術
第十四章 紫外-可見吸收光譜分析
第一節 光譜分析的基本概念
第二節 化合物中的發色基團及助色基團
第三節 紫外-可見分光光度計
第四節 紫外-可見吸收光譜分析方法
第五節 紫外-可見吸收光譜分析的影響因素
下篇 生物化學實驗
實驗1 香菇多糖的製備
實驗2 魔芋多糖的提取、魔芋葡甘聚糖含量的測定及還原糖成分分析
實驗3 甲殼素和殼聚糖的製備及殼聚糖乙醯度的測定
實驗4 脂肪碘值的測定
實驗5 血清總膽固醇含量的測定(磷硫鐵法)
實驗6 卵磷脂的製備
實驗7 維生素c的定量測定(2，6－二氯酚靛酚滴定法)
實驗8 胺基酸定量測定——茚三酮顯色法
實驗9 胺基酸的分離與鑑定——濾紙層析法
實驗10 蛋白質定量測定(1)——微量凱氏定氮法
實驗11 蛋白質定量測定(2)——雙縮脲法
實驗12 蛋白質定量測定(3)——folin－酚法(lowry法)
實驗13 蛋白質定量測定(4)——考馬斯亮藍染色法
實驗14 蛋白質定量測定(5)——bca法
實驗15 蛋白質定量測定(6)——紫外(uv)吸收法
實驗16 蛋白質相對分子質量測定(1)——凝膠過濾層析法
實驗17 蛋白質相對分子質量測定(2)——sds_聚丙烯醯胺凝膠電泳法
實驗18 聚丙烯醯胺等電聚焦電泳測定蛋白質等電點
實驗19 蛋白質及多肽n－末端胺基酸殘基測定——dns－cl法
實驗20 蛋白質印跡法
實驗21 血紅蛋白脫輔基和重組
實驗22 細胞色素c的製備和測定
實驗23 凝膠層析法分離純化含鋅金屬硫蛋白
實驗24 固定化金屬離子親和層析
實驗25 疏水層析分離金屬結合蛋白
實驗26 脂蛋白的分離——瓊脂糖、聚丙烯醯胺凝膠電泳法
實驗27 聚丙烯醯胺凝膠電泳分離乳酸脫氫酶同工酶(活性染色鑑定法)
實驗28 谷胱甘肽轉硫酶的製備及動力學研究
實驗29 溶菌酶的製備及活性測定
實驗30 超氧化物歧化酶的分離純化
實驗31 超氧化物歧化酶活性染色鑑定法
實驗32 酯酶的分離、純化與活性測定
實驗33 親和層析及離子交換層析法分離純化乳酸脫氫酶及其同工酶
實驗34 核酸定量測定(1)——定磷法
實驗35 核酸定量測定(2)——紫外(uv)吸收法
實驗36 豬脾臟dna製備與二苯胺測定法
實驗37 酵母rna提取與地衣酚測定法
實驗38 質粒dna的微量製備(鹼裂解法、煮沸裂解法)
實驗39 質粒dna限制性內切酶酶切及瓊脂糖凝膠電泳
實驗40 大腸桿菌感受態細胞的製備及轉化
實驗41 聚合酶鏈式反應(pcr)
實驗42 核酸原位雜交
實驗43 免疫球蛋白的分離純化
實驗44 免疫學檢測法
實驗45 酶聯免疫吸附測定法
附錄
附錄i 實驗室安全及防護知識
一、實驗室安全知識
二、實驗室滅火法
三、實驗室急救
附錄ii 試劑及試劑配製與保存
一、一般化學試劑的分級
二、試劑配製的一般注意事項
三、易變質及需要特殊方法保存的試劑
四、標準溶液的配製和標定
五、緩衝溶液
六、指示劑
七、乾燥劑
附錄iii 一些常用單位
一、長度單位
二、體積單位
三、質量單位
四、物質的量與物質的量濃度單位
附錄iv 單位與濃度的表示及溶液濃度的調整
一、單位表示
二、溶液濃度的表示及其配製
三、溶液濃度的調整
附錄v 實驗誤差與提高實驗準確度的方法
一、實驗誤差
二、誤差來源
三、提高實驗準確度的方法
四、準確度、精確度和誤差的關係
附錄vi 實驗記錄與實驗報告
一、實驗記錄
二、實驗報告
三、表格和圖解
附錄vii 常用數據表
一、元素的相對原子質量表
二、常用市售酸鹼的濃度
三、一些常用化合物的溶解度(20℃)
四、一些常用做緩衝劑的化合物的酸解離常數
五、某些有機溶劑的主要物理常數
六、胺基酸的一些物理常數
七、常見胺基酸在不同溶劑系統中的rr
八、嘌呤、嘧啶鹼基、核苷和核苷酸的相對分子質量
九、某些蛋白質的物理性質
十、一些常見蛋白質相對分子質量參考值
十一、常用蛋白質相對分子質量標準參照物
十二、常見蛋白質等電點參考值
十三、硫酸銨飽和度的常用表
十四、離心機轉數(r/min)與相對離心力(rcf)的換算
十五、常用化學物質相對分子質量表
附錄viii 層析法常用數據表及層析介質性質
一、常用離子交換纖維素
二、常用國產離子交換樹脂的某些物理化學性質表
三、各類常用離子交換樹脂型號對照表
四、離子交換層析介質的技術數據
五、凝膠過濾層析介質的技術數據
六、聚丙烯醯胺凝膠的技術數據
七、瓊脂糖凝膠的技術數據
八、疏水層析介質的技術數據
九、部分親和層析介質的技術數據
十、各種凝膠所允許的最大操作壓
附錄ix 常用限制性內切酶酶切位點
