氯黴素檢測

1. 1． 1、

氯黴素檢測
目前的氯黴素等抗生素快速檢測，主要有酶聯免疫法（ELISA）和膠體金免疫層析法。
膠體金法的特點是快速、簡單，無需實驗室器材和專業的操作人員，前處理簡單，結果直觀，常溫保存。國內有很多優秀的廠家均有生產，比如上海快靈，北京六角體等。現已廣泛套用於國內各大企業。
膠體金法只需將處理好的樣品加入稀釋液，攪拌均勻，將混合好的檢測液滴入檢測卡中，5~10分鐘即可根據卡上的出線情況判讀結果。
ELISA法反應原理
主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的。在整個反應當中,樣品中氯黴素含量越多，反應呈色就越淡。反之，樣品中氯黴素含量越少，則呈色越深。
試劑盒組成
1、微量測試孔：每條8孔，每板12條
2、氯黴素標準溶液：
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb，1.5ml/瓶
3、10倍濃縮萃取稀釋液：一瓶，30ml/瓶
4、10倍濃縮洗滌液：一瓶，30 ml /瓶
5、氯黴素酶標記物： 一瓶，8 ml/瓶
6、底物溶液：一瓶，12 ml/瓶
7、反應終止液：一瓶，13 ml/瓶
使用說明
A、注意事項
1、使用前先將氯黴素標準溶液6瓶，濃縮萃取稀釋液，濃縮洗滌液，酶標記物，底物溶液及微量測試孔條置於室溫下，回溫30分鐘。
2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配製
用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1： 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水)，即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。
3、回溫後，取出所需微量測試孔條，將剩餘板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好，置於4o℃保存。
B、樣品製備
1.待測物為生乳，則依以下方法進行處理 (5倍稀釋)
取100ul待測生乳加入400ul萃取稀釋液，振盪混合後備用。
2.待測物為蜂蜜，則依以下方法進行處理
a.取2g蜂蜜、4ml蒸餾水與2ml 乙酸乙酯置入離心管中，震盪約5分鐘，使其充分混合均勻。
b.離心10分鐘(3000rpm)，取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，於50℃下氮氣吹乾(溫度請勿超過50oC)。
c.加入0.5ml萃取稀釋液，震盪約10秒鐘後備用。
3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理
a.抽取待檢動物血液，離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用，注意不要有溶血。
b.將3ml血清加入離心管中，再加入6ml乙酸乙酯，震盪混契約30秒。
c.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中，於50oC下氮氣吹乾。
d.於此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘餘物完全溶解後，再加入1 ml萃取稀釋液，震盪約30秒鐘。
e. 離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。
f.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出後，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。
4. 待測物為雞肉或魚、蝦，則依以下方法進行處理
a.將3克樣品剪碎後放入50 ml離心管中，再加入6ml乙酸乙酯，並以均質機均質約1分鐘，再震盪約30秒。
b.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，於50oC下氮氣吹乾。
c.於此玻璃管中加入正己烷2 ml，先將殘餘物完全溶解後(若未能完全溶解，可能會導致回收率降低)，再加入1 ml萃取稀釋液，震盪約30秒鐘。
d.離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。
e.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出後，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。待測物為血清、則依以下方法進行處理
5.待測物為內臟(肝、心等)，則依以下方法進行處理(5倍稀釋)
同上述步驟a~d，但下層液吸出後，再以萃取稀釋液稀釋5倍(即下層液50ul加萃取稀釋液200ml)。
6.待測物為飼料，則依以下方法進行處理(10倍稀釋)
同上述步驟a~d，但下層液吸出後，再以萃取稀釋液稀釋10倍(即下層液30ul加萃取稀釋液270ml)。
C、操作步驟
本產品的酶標記物與氯黴素標準溶液均直接使用，無需再稀釋。
1、於適當微孔中分別加入100mL標準溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前處理的樣品溶液。
3、再於每一微孔中另再加入50mL酶標記物。
4、輕敲盤子四周，使其充分混合後於室溫下避光靜置溫育1小時。
5、將微孔中的反應液甩掉，再將洗液加滿每一微孔後甩掉，重複洗3次。
6、最後一次甩掉後，在吸水紙上拍乾。
7、於每一微孔中加入底物溶液100mL後，輕敲盤子四周，使其充分混合。
8、於室溫下避光靜置溫育20分鐘。
9、於每一微孔中加入100mL反應終止液。
10、用酶標儀于波長450nm下判讀。
D、判定
1. 計算B/B0值。用樣品或標準液吸光度值(B)除以零標準吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值為縱坐標，以標樣濃度的對數值為橫坐標，做標準半對數曲線。
3. 根據每個樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度。
4. 由於樣品經過了預先稀釋，因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。
E、標準曲線
F、靈敏度
氯黴素試劑檢測盒的平均檢測下限為 0.05ppb，此濃度之吸光值與陰性標準溶液(0ppb)之吸光值有明顯的差異。
G、 特異性
針對以下抗生素進行交叉反應之測試，結果如下：
Chloramphenicol =100%
Chloramphenicol(free base) <0.1%
Gentamycin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1%
H、再現性
針對氯黴素檢測試劑盒精密度測試，重複6次，所得不同濃度標準溶液的吸光值變異係數(%CV).
I、回收率
生乳(添加1.0ppb)104~117%
蜂蜜(添加0.3ppb)90~110%
蝦及魚肉(添加0.5ppb)95~110%
雞肉(添加0.5ppb) 90~120%
血清(添加0.5ppb)100~120%
內臟(添加1.0ppb) 100~120%
飼料(添加2.0ppb)80~110%
氯黴素檢測試劑盒
簡介
氯黴素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由於其具有效果好以及價格低廉等優點，目前已被普遍套用於各類家禽、家畜、水產品及蜂製品的各種傳染性疾病的治療。然而氯黴素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能，從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏症。目前，我國已禁止其使用。
簡化了樣品處理方式，使用簡便，省時省力省錢，整個操作過程不到90分鐘。本產品檢測範圍廣(雞肉、魚、蝦、蟹、牛奶、血清、肌肉、組織、飼料與蜂蜜等)，回收率為80%－120%，靈敏度可達到0.05ppb.
簡單
1． 樣品提取方便快捷。
2． 90分鐘得到結果。
3． 只需基本的實驗室設備。
4． 操作人員只需最基本的實驗知識。
準確
1． 結果重現性高。
2． 精確至0.05ppb。
3． 與其它抗體的交叉反應率極低。
產品規格
包裝：每包96孔
靈敏度: 0.05ppb
測試區間：0.05ppb－4.05ppb
檢測時間：80分鐘(提取後)
儲存條件：2-8℃
氯黴素快速檢測試紙（48條/盒） 型號:DP1
氯黴素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由於其具有效果好以及價格低廉等優點，目前已被普遍套用於各類家禽、家畜、水產品及蜂製品的各種傳染性疾病的治療。然而氯黴素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能，從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏症。目前，我國已禁止其使用。
氯黴素檢測試紙，簡化了樣品處理方式，使用簡便，,整個操作過程只須15分鐘。靈敏度可達到3ppb
其原理為：在試劑片的 ‘中央判讀區’噴有2條隱形的線,上面一條為對照線(C線)，下面一條為測試線(T線)。若樣品中氯黴素的濃度小於3ppb，則T線呈色與C線相近；若樣品中氯黴素的濃度大於3ppb，則T線將比C線淺很多或完全看不到線，也就是說，氯黴素濃度越高T線越淺。
簡單：
1． 成套的裝置，提供準確一致的可視的結果
2． 適於現場檢測。15分鐘得到結果。
3． 操作人員只需最基本的化驗知識。
準確：
1． 結果重現性高。
2． 精確至3ppb。
3． 與其它抗體的交叉反應率極低
技術支持：
我們為用戶提供最方便、快捷、周到的服務。
產品規格
包裝：每包16片
靈敏度: 3ppb
檢測時間：15分鐘(提取後)
儲存條件：2-8℃
組成
本試紙組可進行16次實驗
1、反應孔:2條16孔
2、氯黴素指示劑：1瓶
3、檢測試紙片一筒 ：16片
4、小吸管：24支
5、樣品混合棒：20根
6、10倍濃縮稀釋緩衝液：1瓶
試紙使用說明：
A、注意事項
1、 試紙需要乾燥保存，請隨時確保瓶蓋蓋嚴
2、 測試環境溫度>20℃即可。
3、儘量不要觸摸試紙片中央在白色膜面。
4、本試紙使用前，需先將整套組成部分在室溫中回溫30分鐘，以確保反應的正確性。
5、檢測一個樣品使用一個反應孔，一片測試片及一支滴管。未用完的氯黴素指示劑，可放回4℃冰櫃留待下次再用。未用過的微量測試孔，隔次仍可使用。
6、結塊或發臭的牛奶不適合檢測。
7、原倍稀釋緩衝液配製：用蒸餾水將10倍濃縮稀釋緩衝液以1:9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水)，即可作為樣品稀釋液。
B、樣品製備： 1.待測物為牛奶可直接進行檢測。
2.待測物為蜂蜜，則依以下方法進行處理：
以金屬勺取少量待測蜂蜜樣品置於火上加熱至沸騰，用小細管趁熱吸取樣品（勿吸入氣泡），以稀釋緩衝液做1：3稀釋。
3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理：
a.抽取待驗動物血液，離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用，注意不要有溶血。
b將3ml血清加入離心管中，再加入6 ml乙酸乙酯，震盪混契約30秒。
c.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中，於50oC下氮氣吹乾。
d.於此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘餘物完全溶解後，再加入1 ml 稀釋緩衝液，震盪約30秒鐘。
e. 離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。
f.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出後，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5～10分鐘，可改善乳化情形。
4. 待測物為雞肉或魚、蝦，則依以下方法進行處理：
a.將3克樣品剪碎後放入50 ml離心管中，再加入6 ml乙酸乙酯，並以均質機均質約1分鐘，再震盪約30秒。
b.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，於50oC下氮氣吹乾。
c.於此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘餘物完全溶解後(若未能完全溶解，可能會導致回收率降低)，再加入1ml稀釋緩衝液，震盪約30秒鐘。
d.離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。
e.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出後，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。
5.待測物為內臟(肝、心等)，則依以下方法進行處理(5倍稀釋)：
同上述步驟a～d，但下層液吸出後，再以稀釋緩衝液稀釋5倍(即下層液100μl加 稀釋 緩衝液400ul)。
6.待測物為飼料，則依以下方法進行處理(10倍稀釋)：
同上述步驟a～d，但下層液吸出後，再以稀釋緩衝液稀釋10倍(即下層液100μl加 稀釋 緩衝液900ul)。
C、操作步驟：
(若樣品不只一份，請先為樣品及反應孔做好對應編號)
1.以小吸管在微量測試孔中依次加入兩滴待測的樣品（以小吸管吸取時，須將第一滴滴除後，再進行實驗步驟）。
2.充分搖勻氯黴素指示劑，以新的滴管吸取氯黴素指示劑，滴去前兩滴，加入一滴指示劑於待測樣品的測試孔。
3.以手輕輕握住微孔，貼著桌面震盪使其混合均勻約5分鐘。
4.於每個測試孔中放入試紙片（白色端在下）。
5.靜置10分鐘後判讀結果（判讀結果時間不要超過20分鐘）。
D、判讀：
(由於樣品經過了預先稀釋，因此所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數)
情形1—T線比C線深，或一樣深，表示樣品中氯黴素濃度低於3ppb。
情形2—T線比C線淡，表示樣品中氯黴素濃度高於3ppb。
情形3—若C線完全沒出現，則表示測試失敗。