末端轉移酶TdT

末端脫氧核苷酸轉移酶(terminal deoxyribonucleotidyl transferase,TdT,簡稱末端轉移酶),是從動物(通常是牛) 胸腺和骨髓中分離提取的。 末端轉移酶催化脫氧核苷酸添加到DNA 分子的3'-OH 末端,催化作用不需要模板,但需Co2+ 的存在。末端轉移酶可給一群DNA 分子的3' -OH末端接上寡dA 或dC,而給另一群DNA 分子的3'-OH 末端接上寡dT 或dG,兩群分子混合即可使同聚物尾部退火形成環狀分子。

末端轉移酶的主要用途包括:
(1)給載體或CDNA加上互補的同聚尾(用於建立體外重組DNA分子時在DNA片段末端加上一一個同聚物尾巴,兩種不同的DNA分子加上不同的但可以互補的即A和T、C和G的尾巴後,經過退火或復性,兩種尾巴便可以藉助互補作用連線在一起)。在CDNA文庫建立時,這種加尾方法是使CDNA插人載體中的常用方法之一。
(2)用於DNA片段3'末端的放射性核素標記。末端轉移酶在Mg2*存在的條件下,選擇3'-OH端單鏈DNA為引物加成核苷酸,在CO+存在的條件下,選擇3'-OH端雙鏈DNA為引物加成核苷酸,形成多聚核苷酸尾。如果在反應系統中加人核素標記的核苷酸,那么便可得到3'端標記的DNA分子。該法常用於核酸末端標記和核酸連線的互補多聚尾(連線頭)。

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