TDT[末端脫氧核苷酸轉移酶]

末端轉移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)是一種無需模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結合到DNA分子的3'羥基端。

簡介

【濃度】20u/ul

【性狀】懸浮液，重組酶。末端轉移酶(Terminal transferase,TdT)是一種無需模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結合到DNA分子的3'羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子均可作為TdT的底物。一般操作是:先在載體上打開一單個位點，把它與末端轉移酶和某一dNTP(如dATP)一起保溫以使添尾，另一待插入的外源DNA片段則用互補的用同法添dNTP(dTTP)用同法添尾。接著使上述兩種都接上互補單鏈尾的DNA片段彼此退火，使形成一雜合載體來轉化受體菌。雜合載體中的裂隙或切口可被受全菌所修復。隨酶提供10×反應緩衝液和25mMCoCl2

【來源】一般自牛胸腺中分離。

【用途】生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物;DNA的3'末端標記。

功能

"末端轉移酶"催化的加上核苷酸至DNA分子的3'末端。不像大多數的DNA聚合酶，它不需要一個模板。這種酶的優選底物是3'突出端，但它也可以添加"核苷酸"(nucleotifes)至"鈍末端"(blunt end)或"凹陷的3'末端"(recessed 3' end)。鈷是一種必要的輔因子，但是在酶催化後反應在的鎂(Mg)和錳(Mn)施用"體外"(in vitro)。

使用

末端轉移酶在分子生物學中的套用。它可以被用來在cDNA末端的快速擴增(RACE)中來添加"核苷酸"(nucleotide)，然後可以用來作為在後續PCR的"引物"(primer)的模板。它也可以用於添加標記放射性同位素的核苷酸，例如在TUNEL檢測(末端脫氧核苷酸轉移酶"dUTP缺口末端標記"(dUTP Nick End Labeling))，用於細胞凋亡的示範(其中的標記，在某種程度上，通過片段化DNA來進行)。也可用於治療"急性淋巴性白血病"診斷之"免疫螢光測定"(immuno-fluorescence)。

在免疫組織化學中，抗體TdT酶可用於顯示未成熟的T細胞和B細胞以及多能的"造血(Haematopoiesis)幹細胞"的存在，其具有抗原，而成熟的淋巴樣細胞總是呈"TdT陰性"。而末端轉移酶陽性的細胞中發現少量的健康淋巴結和扁桃體，急性淋巴細胞白血病的惡性細胞也呈"TdT陽性"，而抗體，因此可以被用來作為面板診斷及區別這種疾病的一部分，比如，"初發期的小細胞腫瘤"(small cell tumours of childhood)。