原理
差減雜交通過Tester（T,待富集特有序列的樣本）第一鏈cDNA與Diver（D,用於扣除tester中共有序列的樣本）mRNA在一定溫度下復性，並用羥基磷灰石柱層析除去cDNA*mRNA雜合體，以此富增Tester樣本中特異的cDNA。較傳統的差示篩選方法靈敏度有所提高，但mRNA需要大量的Driver才能使雜交充分進行。此外經過層析，所回收的cDNA量很低，嚴重影響實驗的進一步進行。分類
代表性差異分析（representational differenec analysis, RDA）酶降解差減雜交（enzymatic degrading subtraction, EDS）
接頭捕獲差減雜交（linker capture subtraction LCS）
抑制性差減雜交（suppression subtractive hybridization SSH）
步驟
第一步：對T群和D群的cDNA（原核生物為DNA，下同）進行PCR擴增。第二步：給T群的cDNA加“修飾”，使之區別於D群的cDNA，可以通過加接頭（RDA、LCS及SSH）或摻入放射性核素來實現。
第三步：用過量的D cDNA，與經“修飾”過的T cDNA混合，經變性後退火復性，T與D中共有的序列形成T-D異源雜交分子，T中特有的序列形成T-T同源雜交分子
第四步：通過PCR擴增或酶解反應，只有T-T分子能得到有效擴增或保留。
這種差減雜交步驟可重複數次以儘可能去除共有的序列，同時使T群中特有的序列得到富集。
分子生物學實驗技術
| 分子生物學(molecularbiology) 是從分子水平研究作為生命活動主要物質基礎的生物大分子結構與功能，從而闡明生命現象本質的科學。而分子生物學的各種實驗方法，是本學科得以高速發展和不斷取得突破性成就的基礎。隨著學科的發展和各相關交叉學科的進步，分子生物學實驗技術必定會越來越高效與精準，成為人類探索自然、改善自然的有力工具。 |
