密碼子最佳化

概述

密碼子最佳化

利用PHD系列程式和PSIPRED程式對血吸蟲疫苗候選抗原-日本血吸蟲大陸株副肌球蛋白(Sjc97)的空間結構分析表明,Sjc97分子為非球形蛋白,二級結構90％以上為α-螺鏇結構.為確定副肌球蛋白的保護性抗原表位,選擇在副肌球蛋白coil區將其分為彼此有重疊區的四個片段.經畢氏酵母偏愛密碼子最佳化的兩個基因片段sjc97fl和sjc97f3通過不對稱PCR技術合成,並分別在大腸桿菌和畢氏酵母系統中成功表達.誘導表達產生的31kDa和28kDa蛋白經SDS-PAGE凝膠電泳和蛋白印跡反應證實為所需的目的蛋白.蛋白產物經親和層析和離子層析純化後,分別與ISA720佐劑和鋁佐劑乳化,免疫近交系C57BL/6小鼠和遠交群昆明小鼠.ELISA法檢測血清抗體滴度表明,抗rSjc97f3的特異性抗體滴度顯著高於抗rSjc97f1抗體滴度(P<0.05).此外,小鼠品系和佐劑也表現出差異,對rSjc97f1,ISA720佐劑免疫組小鼠所誘導的抗體滴度顯著高於鋁佐劑免疫組(P<0.05);對rSjc97f3,昆明鼠對抗原的反應性顯著高於C57BL/6鼠(P<0.05).尾蚴膜反應顯示rSjc97f1和rSjc97f3免疫血清均可識別天然副肌球蛋白,表明該重組蛋白具有良好的免疫原性.

抗蟲基因

通過PCR從克隆載體pUC18-3Z/Cry2A*上擴增水稻偏愛型密碼子最佳化的抗蟲基因cry2A*,經限制性內切酶NdeI和BamHI雙酶切定向插入到原核表達載體pET-28a(+),成功構建了在表達蛋白的N端只帶有6個組氨酸標籤的融合蛋白表達載體pET-28a(+)/Cry2A*,並轉入大腸桿菌BL21(DE3)中。通過對其表達條件進行最佳化,發現在IPTG濃度為0.05mmol/L、誘導時間為3h、誘導溫度為20℃的表達條件下目的蛋白大部分以可溶形式進行表達。採用Ni-NTA親和柱純化得到高純度目的蛋白,薄層掃描分析蛋白純度達到95%。

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