簡介
kozak序列: Kozak consensus sequence, Kozak consensus or Kozak sequence存在於真核生物mRNA的一段序列,其在翻譯的起始中有重要作用。
核糖體能夠識別mRNA上的這段序列,並把它作為翻譯起始位點。注意這段序列並不是ribosomal binding site (RBS)核糖體結合位點,而是帽子結構。
真核生物基因中起始密碼子上下游的最佳序列為,-3位為嘌呤鹼基;+4位為G,起始密碼子AUG中的A處於+1位。A/GCCAUGG被稱為kozak序列或掃描序列。
KOZAK是一個女科學家,她研究過起始密碼子ATG周邊鹼基定點突變後對轉錄和翻譯所造成的影響,並總結出在真核生物中,起始密碼子兩端序列為:—— G/N-C/N-C/N-ANNATGG——,如GCCACCATGG、GCCATGATGG時,轉錄和翻譯效率最高,特別是-3位的A對翻譯效率非常重要。該序列被後人稱為Kozak序列,並被套用於表達載體的構建中。
規則
所謂Kozak規則,即第一個ATG側翼序列的鹼基分布所滿足的統計規律,若將第一個ATG中的鹼基A,T,G分別標為1,2,3位,則Kozak規則可描述如下:(1)第4位的偏好鹼基為G;
(2)ATG的5’端約15bp範圍的側翼序列內不含鹼基T;
(3)在-3,-6和-9位置,G是偏好鹼基;
(4)除-3,-6和-9位,在整個側翼序列區,C是偏好鹼基。
Kozak規則是基於已知數據的統計結果,不見得必須全部滿足,一般來說,滿足前兩項即可。
真核引物設計需在ATG前加上GCCACC
不論全長還是部分,在做真核表達時,一般都要帶上kozak序列,用部分cDNA時,還要加上ATG。多加一些上游序列對你有利,因為一些上游序列自帶KOZAK序列;或其他促進表達的序列。.有利於引物設計,因為從ATG開始設計引物,不是每個基因都可以的。引物擴增時頭幾個容易錯,在上游序序列就沒關係了。
加Kozark sequence(GCCACC),kozak sequence是用來增強真核基因的翻譯效率的。是最最佳化的ATG環境,避免ribosome出現leaky scan