中國話劇導演、戲劇教育家、詞人。1902年11月8日生於江蘇常州。原名翔，字上千、一字行。1915年考入上海大同學院預科，五四運動後，任中學教師，積極參加學運和愛國劇運，為業餘演出導演了《山河淚》、《最後一課》、《國魂》等劇。
1937年夏，在上海為麥倫中學導演《三王》一劇，參加愛國聯合公演，先後與張庚、於伶等結識，從事救亡劇運。同年冬參加青鳥劇社。1939年於伶等籌建上海劇藝社，他導演了首演劇目《人之初》，獲得成功。之後，又排演了不少優秀劇目及世界名劇，導演藝術日臻成熟，與黃佐臨、費穆、朱端鈞合稱為“孤島四大導演”。
抗戰勝利後，與顧仲彝等創立上海市立實驗戲劇學校，任教務長，掩護田漢、安娥、洪深、歐陽予倩等留校任教，領導師生參加反飢餓遊行等進步活動後被迫辭職，轉入南京國立戲劇專科學校任教授。
中華人民共和國成立後，為蘇州市第一屆人民代表大會代表，被蘇南公署聘任為國立社教學院教授、戲劇組主任。1949年底參軍後，任華南軍政大學文藝系副主任、中國人民解放軍第三野戰軍政治部文藝幹部訓練班副主任。1952年調上海科學教育電影製片廠任副廠長，1957年9月調上海戲劇學院，翌年任副院長併兼任研究室、導演系主任。1979年執導《霜天曉角》，在話劇舞台上樹立起魯迅的生動形象，獲文化部演出獎。1979年當選為中國戲劇家協會理事，中國文聯全國委員。
吳仞之導演的戲主題思想鮮明，邏輯性強，哲理性突出，劇情發展和人物貫穿行動合情合理，以真實、淳樸、深刻、細緻、精巧的手法，感人以情，動人以理。他主張導演應該以邏輯思維與形象思維並重。他對各種戲劇學派均有研究，博攬眾長。教學上因人施教，不拘一格。1941年發表的《舞台與四次元空間》，第一次提出如何在舞台上運用時空結合的“四維空間”學說，至今仍有實踐意義。
《霜天曉角》演出後，專心著作，完成《仞之藝文集》4卷。
