MALBAC技術
MALBAC(multiple annealing and looping-based amplification cycles),即多次退火環狀循環擴增技術,是"目前最先進的全基因組擴增技術"。該技術於2012年12月刊登於《科學》雜誌上(Science).不同於以往的非線性或指數型擴增方法,MALBAC技術利用特殊引物,使得擴增子的結尾互補而成環,從而很大程度上防止了DNA的指數性擴增。
技術特點
1. 起始模板量由微克級(μg)降低到皮克級(pg)。2. 擴增均勻性遠遠好於其他擴增技術。
細胞拷貝數CNV分析。結果分析:分析與標準樣品高度一致。
3. 90%以上位點可被成功擴增。
技術優勢
可適用樣品類型
2.樣本高度異質,細胞間存在重大差異。
MALBAC技術和其它WGA技術相比較
WGA技術 | 主要原理 | 優點 | 缺點 | 套用 |
MALBAC | 多次退火環狀循環擴增技術 | 操作簡單,產量高,最低起始模板幾個皮克,結果可靠可重複 | 起始模板量極低時擴增難度加大 | 二代測序、CGH、SNP分型、STR分型、基因克隆、螢光定量 |
DOP-PCR | 部分隨機引物法 | 操作簡單,最低起始模板量達50pg,產物片段大小0.5-10kb | 起始模板量低時擴增偏差大 | CGH, SSCP分析,SNP分型,STR分型 |
LM-PCR | 連線介導的 PCR反應 | 產量高,片段長,對模板DNA質和量要求低 | 操作繁瑣,多步操作易丟失模板 DNA | CGH,LOH研究,STR分型 |
PEP-PCR | 完全隨機引物法 | 對模板DNA質和量要求低,操作簡單,易改進,50 ng起始模板可產生0.2-0.5μg產物,最低起始模板量可達5 pg。 | 產量低,保真性差 | LOH研究,SNP分型,STR分型 |
MDA | 多重置換擴增 | 產量高,50 ng起始模板量可產生10-20μg產物,最低起始模板量可達10 pg,忠實性好。 | 起始模板量低時擴增偏差大 | CGH,RFLP分析,SNP分型,STR分型 |
pWGA | 體外再造T7噬菌體DNA複製 | 產量高,對模板質和量要求低,操作簡單,最低起始模板量可達100 fg | 保真性稍差 | SNP分型,STR分型 |