原理
陣發性睡眠性血紅蛋白尿症(陣發性睡眠性血紅蛋白尿)患者, 因其部分紅細胞對補體敏感而易於溶解, 從而發生溶血現象。在實驗室中, 可將紅細胞置於酸化(pH 6.4~6.5)血清中的補體下, 正常人紅細胞不溶解, 而陣發性睡眠性血紅蛋白尿的部分患者中可見其紅細胞溶解。若所用血清系患者本身的血清, 紅細胞溶解更為顯著。一般採用ABO型或與患者同型血清進行實驗。但如將血清加熱(56℃, 30分鐘)後, 則其中補體破壞, 誘導溶血作用亦隨之失活。
步驟
試劑與儀器
0.2 mol/L鹽酸、 0.154 mol/L氯化鈉溶液、 水浴箱、 離心機、 試管與玻璃珠。
操作方法
(1)取患者血5 mL置入離心管內, 放入玻璃珠搖動以脫去纖維蛋白。加入3倍0.9%氯化鈉溶液洗滌, 再離心5分鐘棄去上清液。再重複洗滌2次, 最後1次離心10分鐘, 棄去上清液後, 用0.9%氯化鈉溶液配製成50%紅細胞懸液。
(2)取正常同型或AB型血6 mL, 置於8 mL試管中, 待分離血清作為正常血清, 並取 1/3 置56℃ 水浴中30分鐘作為正常滅活血清。
(3)編制1、 2、 3、 4號試管。
1號試管: 正常同型或AB型血清0.5 mL、 0.2 mol/L鹽酸0.05 mL、 50%患者紅細胞懸液0.05 mL。
2號試管: 正常同型或AB型血清0.5 mL、 50%患者紅細胞懸液0.05 mL、
3號試管: 正常同型或AB型血清滅活0.5 mL、 0.2 mol/L鹽酸0.05 mL、 50%患者紅細胞懸液0.05 mL。
4號試管: 50%患者紅細胞懸液0.05 mL、 0.9%氯化鈉溶液0.5 mL。
(4)將各管混勻, 於37℃ 水浴中溫育1小時後, 離心觀察結果。
(5)一般第1管有明顯溶血, 第2管有輕度溶血或不溶血, 而第3管、 第4管均無溶血, 表示Hams試驗陽性。
正常參考值
陰性
臨床意義
酸化溶血試驗(Hams試驗)陽性主見於陣發性睡眠性血紅蛋白尿綜合徵, 本試驗假陽性與假陰性少見, 假陽性偶見於CDAⅡ型或HEMPAS中, 此時如改用患者酸化血清進行試驗, 則結果轉陰, 而陣發性睡眠性血紅蛋白尿綜合徵者仍為陽性。
注意事項
一、本試驗對陣發性睡眠性血紅蛋白尿的診斷是特異的,但試驗的敏感性取決於補體敏感細胞的多少,故本試驗敏感性不夠,可能出現假陽性。
二、試驗所用血清不夠新鮮時,由於補體成分含量不足可能出現假陰性。
三、多次輸血的患者,不正常細胞相對減少,可出現陰性。