介紹
CFSE是無色和非螢光的非極性分子,可自由擴散進入細胞,被胞內酯酶裂解,其琥珀醯亞胺脂基團不可逆地與細胞內氨基特異性結合,形成螢光素結合物,偶聯並滯留於胞內。當細胞分裂時,CFSE螢光結合物可平均分配至兩個子代細胞,而螢光強度為親代細胞的一半。因此,利用流式細胞術可檢測到CFSE標記的細胞增殖群體具有系列減半的螢光強度。CFSE不僅可用於細胞增殖的體外實驗,也可用於追蹤細胞在體內的分裂增殖過程。
淋巴細胞增殖實驗以及混合淋巴細胞反應是免疫學實驗研究中的基本技術和必要手段,傳統方法主要利用形態學方法觀察和同位素(3H-TdR)摻入法進行檢測。3H-TdR摻入法主要用3H-TdR標記DNA合成原料,細胞增殖過程中放射活性會隨著DNA合成的增加而增加,此法特異性良好,科學研究中常用於體外細胞增殖實驗的檢測;但由於該方法存在放射性污染,在科研尤其是教學中的實際套用受到一定的限制。目前常用MTT(或CCK-8)等方法進行檢測,其原理主要是利用活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶將MTT還原成藍紫色甲瓚顆粒,以顆粒溶解後呈現的顏色深淺反映細胞活性,藉此反映細胞的增殖狀態,但由於淋巴細胞增殖過程中往往伴隨著活化誘導的細胞凋亡,單從細胞活性往往無法準確反映細胞的增殖狀態。而利用CFSE標記技術替代傳統的3H-TdR摻入和MTT法來進行免疫學相關實驗如淋巴細胞增殖試驗及混合淋巴細胞反應,不僅可以改善目前較為落後的技術手段,提高科研水平;還可以拓寬免疫學相關新技術在教學方面的套用領域和套用程度,全面提高學生的綜合素質和能力。