結合可能
在模板變性後溫度快速冷卻至40℃~60℃(某個退火溫度)的時候,可使引物和模板發生結合。由於模板DNA比引物複雜得多,引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高於模板互補鏈之間的碰撞,這就使PCR後期的過程成為可能。
溫度與時間

Tm值(解鏈溫度)=4(G+C)+2(A+T)
復性溫度=Tm值-(5~10℃)
在Tm值允許範圍內,選擇較高的復性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結合,提高PCR反應的特異性。復性時間一般為30~60sec,足以使引物與模板之間完全結合。
在金屬加工領域,退火溫度是指退火時金屬應加熱達到的溫度。據有關文獻介紹,不同金屬材料的退火溫度為:鉑,900—1000℃;銅,650℃;黃銅,600—650℃;鎳銀,650—680℃;鋁,283—350℃等。