貼壁培養

貼壁培養(monolayer culture)是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養。

生長特性

貼壁依賴型細胞在培養時要貼附於培養(瓶)器皿壁上,細胞一經貼壁就迅速鋪展,然後開始有絲分裂,並很快進入對數生長期。一般數天后就鋪滿培養表面,並形成緻密的細胞單層。

貼壁培養的優點

●容易更換培養液;細胞緊密黏附於固相表面,可直接傾去舊培養液,清洗後直接加入新培養液。

●容易採用灌注培養,從而達到提高細胞密度的目的;因細胞固定表面,不需過濾系統。

●當細胞貼壁於生長基質時,很多細胞將更有效的表達一種產品。

●同一設備可採用不同的培養液/細胞的比例。

●適用於所有類型細胞。

3. 貼壁培養的缺點:與懸浮培養法相比

●擴大培養比較困難,投資大;

●占地面積大;

●不能有效監測細胞的生長;

細胞貼壁的表面

要求具有淨陽電荷和高度表面活性。對微載體而言還要求具一定電荷密度;若為有機物表面,必須具有親水性,並帶陽電荷。

貼壁培養系統

主要有轉瓶、中空纖維(後面專題介紹)、玻璃珠、微載體系統(後面介紹)等。

●轉瓶培養系統:培養貼壁依賴型細胞最初採用轉瓶系統培養。轉瓶培養一般用於小量培養到大規模培養的過渡階段,或作為生物反應器接種細胞準備的一條途徑。 細胞接種在旋轉的圓筒形培養器-轉瓶中,培養過程中轉瓶不斷旋轉,使細胞交替接觸培養液和空氣,從而提供較好的傳質和傳熱條件。

轉瓶培養具有結構簡單,投資少,技術成熟,重複性好,放大只需簡單的增加轉瓶數量等優點。

但也有其缺點:勞動強度大,占地空間大,單位體積提供細胞生長的表面積小,細胞生長密度低,培養時監測和控制環境條件受到限制等。

現在使用的轉瓶培養系統包括二氧化碳培養箱和轉瓶機兩類。

●反應器貼壁培養 此種培養方式中,細胞貼附於固定的表面生長,不因為攪拌而跟隨培養液一起流動,因此比較容易更換培養液,不需要特殊的分離細胞和培養液 的設備,可以採用灌流培養獲得高細胞密度,能有效地獲得一種產品;但擴大規模較難,不能直接監控細胞的生長情況,故多用於製備用量較小、價值高的生物藥 品。

CelliGen、 CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器是常用的貼壁培養式生物反應器,用於細胞貼壁培養時可用籃式攪拌系統和圓盤狀載體。此載體是 直徑6毫米無紡聚酯纖維圓片,具很高表面積與體積比(1200cm2/g),利於獲得高細胞密度。籃式攪拌系統和載體培養是目前貼壁細胞培養使用最多方 式,用於雜交瘤細胞、Hela細胞、293細胞、CHO細胞及其它細胞培養。此種方式培養細胞,細胞接種後貼壁快。

相關詞條

相關搜尋

熱門詞條

聯絡我們