複製酶

概況

亦稱RNA合成酶。是依賴於RNA的聚合酶。是以病毒RNA為模板, 4種 5′-三磷酸核苷為底物的合成RNA的酶。是從感染RNA型噬菌體或癌病毒的細胞分離出來的。

(一)一種依賴於RNA的RNA聚合酶。以RNA為模板,由RNA聚合酶催化核苷5'-三磷酸合成RNA。

(二)在DNA複製時與新生DNA鏈延長有關的酶。原核細胞複製酶包括DNA聚合酶I,Ⅱ和DNA聚合酶III全酶。DNA聚合酶III全酶是體內DNA複製所必需的酶,它可在DNA的單鏈模板上,在引物的3′-OH上,以每秒約1000個核苷酸的速率逐個延長新生的DNA鏈。DNA聚合酶III全酶由多種亞基組成,具有3′-5′和5′-3′的外切酶活性,分子量約2.12×105DNA聚合酶a有可能是真核生物的複製酶,活性隨細胞周期而變化;分子量165×103~175×103之間,不具外切酶活性。

發展歷史

1990年,美國科學家Golemboski在研究TMV基因組的編碼54KD蛋白的基因時,意外地發現將該基因轉入菸草後獲得的轉其因菸草能完全抵抗TMV的侵染。國內有些實驗室很快克隆了TMV和CMV的複製酶基因,並獲得了高抗性菸草轉基因工程植株。利用病毒複製酶基因介導的抗性與上述其他基因介導的抗性相比,具有以下優勢:複製酶的抗性水平與整合到染色體上的基因拷貝數無關,而轉CP基因的抗性與整合到染色體上的基因拷貝數有關;轉複製酶基因的植株,對裸露的病毒RNA也有抗性,而轉CP基因一般不抗裸露病毒的攻擊;一般轉CP基因植株只能延遲植物發病,在受到20~100 ug/mlTMV或CMV的侵染時,保護作用就被克服,而且轉移複製酶植株可抗高達50 ug/ml病毒粒子的侵染,且具較為穩定的抗性長效性;轉複製酶基因的植株,檢測不出轉基因蛋白產物的存在,可避免外源基因的產物在體內表達對植物生長後的不利影響,對解決基因工程產品的安全性有較好的作用,因此,有人認為,利用複製酶基因介導抗性,將會使抗TMV育種得到進一步發展。

反應簡介

對反應來說,Mg++是必要的,而且模板的特異性高,例如大腸桿菌Qβ噬菌體的酶只能以Qβ或類綠的噬菌體RNA為模板。反應生成物具有與模板完全相同的結構。反應分兩個階段進行,首先合成與模板 RNA(+鏈)有互補的核苷酸序列的RNA(-鏈),繼之以此(—)鏈為模板合成(+)鏈。Qβ噬菌體的酶由一種來源於噬菌體的蛋白質和三種大腸桿菌的蛋白質構成,合成反應還有另外兩個大腸桿菌的蛋白質因子參與。

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