內容簡介
蛋白質高效表達是從事生物化學、分子生物學、生物技術、生物醫藥等基礎和套用研究的科研人員必須涉及和面對的基本技術問題。本書作為一本蛋白質高效表達的工具書，將常見的基因高效表達系統及其相關要點和經驗進行總結，具有以下內容特色：
涵蓋了大腸桿菌、酵母、芽孢桿菌、哺乳動物、轉基因動物、轉基因植物等主要基因表達系統；
專門章節論述重組蛋白的分離純化和復性這一重要問題；
內容較精要，匯集了蛋白質科學工作者的工作經驗，實用性較強。
本書可供分子生物學、發育生物學、蛋白質組學、藥學等領域的教學和研究人員參考閱讀。
目錄
第一章 大腸桿菌表達體系
蛋白質科學與技術叢書第一節 原核表達載體
一、pET載體
二、pKK223?3載體
三、IMPACTTM系統載體和pMALTM系統載體
四、pWIN表達系統
五、pGEX系統
第二節 原核表達宿主菌
第三節 選擇構建載體的策略
第四節 重組蛋白的溶解性
第五節 增加蛋白質穩定性的策略
一、宿主菌選擇
二、分泌型表達
三、包含體
第六節 大腸桿菌表達體系的基本操作流程
一、基因片段的製備
二、載體製備
三、載體酶切消化反應和從凝膠進行載體的純化和回收
四、製備插入片段
五、將基因片段克隆到表達載體
六、篩選陽性克隆、測序分析
七、轉化表達宿主菌及誘導和最佳化目的蛋白表達
八、培養放大及目的蛋白的純化
第二章 重組蛋白的分離純化和復性
第一節 概述
第二節 分離純化的方法策略及其套用
第三節 包含體蛋白質的摺疊復性
一、 蛋白質摺疊的過程和機理
二、包含體的分離和溶解
三、溶解後包含體蛋白質的摺疊復性
第四節 可溶重組分子的分離純化
一、色譜技術在分離純化中的套用
二、親和標籤在重組蛋白分離純化中的套用
第五節 結語
第三章 酵母表達系統
第一節 幾種主要酵母表達系統
一、釀酒酵母表達系統
二、甲醇營養型酵母表達系統
三、 裂殖酵母表達系統
四、 乳酸克魯維亞酵母表達系統
五、其他酵母表達系統
第二節 酵母表達載體概況
一、酵母載體的類型
二、酵母載體的基本結構
第三節 酵母表達系統的研究方向
一、提高外源蛋白在酵母中的表達水平
二、提高外源基因表達產物的質量
第四節 酵母表達系統的套用和展望
第四章 芽孢桿菌基因表達系統
第一節 芽孢桿菌基因表達系統的特點
第二節 芽孢桿菌表達載體
一、自主複製質粒
二、整合質粒
三、噬菌體
四、轉化方法
第三節 宿主菌
第四節 外源基因在芽孢桿菌中的分泌表達
第五節 芽孢桿菌高效表達外源基因的策略及發展方向
一、降低芽孢桿菌胞外蛋白酶活性
二、提高表達質粒在細胞中的穩定性
三、擴大芽孢桿菌宿主/載體表達系統
第五章 哺乳動物細胞表達系統
第一節 哺乳動物細胞表達載體
一、 表達載體基本種類與組成元件
二、篩選標記基因
第二節 常見的生產用細胞表達系統
一、CHO表達系統
二、鼠骨髓瘤細胞系
三、COS細胞
四、Vero細胞
第三節 大規模哺乳動物細胞培養的新趨勢
一、抑制細胞凋亡
二、可誘導表達
三、新的生產工藝
第六章 轉基因動物表達系統
第一節 製作轉基因動物常用方法
第二節 同源重組介導的基因打靶
第三節 組織特異性表達——乳腺表達的調控元件
一、乳汁酪蛋白
二、乳清酸蛋白
三、β?乳球蛋白基因
第四節 顯微注射法製備轉基因小鼠技術
一、注射DNA的純化和定量
二、轉基因實驗用鼠的種類
三、超數排卵、受精卵收集和培養
四、顯微注射
五、胚胎移植
六、檢測
第五節 問題與展望
第七章 轉基因植物生物反應器
第一節 引言
第二節 轉基因植物的原理與方法
一、概述
二、轉基因植物的選擇
三、農桿菌介導的轉基因技術
四、病毒載體介導的轉基因技術
五、直接轉化法獲得轉基因植物
第三節 適於重組蛋白表達的植物宿主
一、菸草
二、穀類和豆類作物
三、水果和蔬菜
第四節 轉基因植物表達重組蛋白研究進展
一、轉基因植物可食疫苗研究
二、轉基因植物抗體工程
第五節 葉綠體轉基因工程
一、葉綠體基因組的特徵
二、葉綠體轉化系統的優越性
三、外源基因導入葉綠體的方法
四、 葉綠體中表達外源基因的研究進展
五、存在問題與解決策略
六、葉綠體遺傳轉化的前景和展望
第六節 轉基因植物安全標記基因的使用及抗性基因的剔除
一、轉基因植物使用的安全標記基因
二、轉基因植物中抗性基因的剔除
三、展望
第七節 理性認識轉基因植物的安全問題
一、轉基因植物食品的安全問題
二、轉基因植物的生態安全問題
參考文獻
