圖書信息
蛋白質高效表達技術出版社: 化學工業出版社; 第1版 (2011年10月20日)
叢書名: 蛋白質科學與技術叢書
平裝: 145頁
正文語種: 簡體中文
開本: 16
ISBN: 9787122116734
條形碼: 9787122116734
商品尺寸: 23.8 x 16.8 x 0.8 cm
商品重量: 240 g
內容簡介
《蛋白質高效表達技術》是從事生物化學、分子生物學、生物技術、生物醫藥等基礎和套用研究的科研人員必須涉及和面對的基本技術問題。《蛋白質高效表達技術》作為一本蛋白質高效表達的工具書，將常見的基因高效表達系統及其相關要點和經驗進行總結，具有以下內容特色：涵蓋了大腸桿菌、酵母、芽孢桿菌、哺乳動物、轉基因動物、轉基因植物等主要基因表達系統；專門章節論述重組蛋白的分離純化和復性這一重要問題；內容較精要，匯集了蛋白質科學工作者的工作經驗，實用性較強。《蛋白質高效表達技術》可供分子生物學、發育生物學、蛋白質組學、藥學等領域的教學和研究人員參考閱讀。
編輯推薦
《蛋白質高效表達技術》包括了大腸桿菌表達體系、重組蛋白的分離純化和復性、酵母表達系統、芽孢桿菌基因表達系統、哺乳動物細胞表達系統、轉基因動物表達系統、轉基因植物生物反應器等。
目錄
第一章 大腸桿菌表達體系1
第一節 原核表達載體2
一、pET載體4
二、pKK223?3載體5
三、IMPACTTM系統載體和pMALTM系統載體5
四、pWIN表達系統5
五、pGEX系統5
第二節 原核表達宿主菌6
第三節 選擇構建載體的策略8
第四節 重組蛋白的溶解性8
第五節 增加蛋白質穩定性的策略9
一、宿主菌選擇10
二、分泌型表達10
三、包含體11
第六節 大腸桿菌表達體系的基本操作流程11
一、基因片段的製備11
二、載體製備12
三、載體酶切消化反應和從凝膠進行載體的純化和回收12
四、製備插入片段13
五、將基因片段克隆到表達載體14
六、篩選陽性克隆、測序分析16
七、轉化表達宿主菌及誘導和最佳化目的蛋白表達16
八、培養放大及目的蛋白的純化17
第二章 重組蛋白的分離純化和復性18
第一節 概述18
第二節 分離純化的方法策略及其套用20
第三節 包含體蛋白質的摺疊復性22
一、蛋白質摺疊的過程和機理24
二、包含體的分離和溶解25
三、溶解後包含體蛋白質的摺疊復性26
第四節 可溶重組分子的分離純化32
一、色譜技術在分離純化中的套用33
二、親和標籤在重組蛋白分離純化中的套用34
第五節 結語47
第三章 酵母表達系統48
第一節 幾種主要酵母表達系統49
一、釀酒酵母表達系統49
二、甲醇營養型酵母表達系統50
三、裂殖酵母表達系統52
四、乳酸克魯維亞酵母表達系統52
五、其他酵母表達系統52
第二節 酵母表達載體概況53
一、酵母載體的類型53
二、酵母載體的基本結構54
第三節 酵母表達系統的研究方向55
一、提高外源蛋白在酵母中的表達水平55
二、提高外源基因表達產物的質量55
第四節 酵母表達系統的套用和展望56
第四章 芽孢桿菌基因表達系統57
第一節 芽孢桿菌基因表達系統的特點57
第二節 芽孢桿菌表達載體58
一、自主複製質粒58
二、整合質粒58
三、噬菌體59
四、轉化方法59
第三節 宿主菌59
第四節 外源基因在芽孢桿菌中的分泌表達59
第五節 芽孢桿菌高效表達外源基因的策略及發展方向60
一、降低芽孢桿菌胞外蛋白酶活性60
二、提高表達質粒在細胞中的穩定性60
三、擴大芽孢桿菌宿主/載體表達系統61
第五章 哺乳動物細胞表達系統62
第一節 哺乳動物細胞表達載體65
一、表達載體基本種類與組成元件65
二、篩選標記基因66
第二節 常見的生產用細胞表達系統70
一、CHO表達系統70
二、鼠骨髓瘤細胞系70
三、COS細胞71
四、Vero細胞71
第三節 大規模哺乳動物細胞培養的新趨勢71
一、抑制細胞凋亡71
二、可誘導表達73
三、新的生產工藝73
第六章 轉基因動物表達系統74
第一節 製作轉基因動物常用方法74
第二節 同源重組介導的基因打靶76
第三節 組織特異性表達——乳腺表達的調控元件80
一、乳汁酪蛋白81
二、乳清酸蛋白82
三、β?乳球蛋白基因83
第四節 顯微注射法製備轉基因小鼠技術85
一、注射DNA的純化和定量85
二、轉基因實驗用鼠的種類85
三、超數排卵、受精卵收集和培養86
四、顯微注射86
五、胚胎移植87
六、檢測87
第五節 問題與展望89
第七章 轉基因植物生物反應器91
第一節 引言91
第二節 轉基因植物的原理與方法93
一、概述93
二、轉基因植物的選擇93
三、農桿菌介導的轉基因技術94
四、病毒載體介導的轉基因技術100
五、直接轉化法獲得轉基因植物102
第三節 適於重組蛋白表達的植物宿主105
一、菸草105
二、穀類和豆類作物105
三、水果和蔬菜106
第四節 轉基因植物表達重組蛋白研究進展107
一、轉基因植物可食疫苗研究107
二、轉基因植物抗體工程114
第五節 葉綠體轉基因工程117
一、葉綠體基因組的特徵117
二、葉綠體轉化系統的優越性118
三、外源基因導入葉綠體的方法119
四、葉綠體中表達外源基因的研究進展120
五、存在問題與解決策略120
六、葉綠體遺傳轉化的前景和展望122
第六節 轉基因植物安全標記基因的使用及抗性基因的剔除122
一、轉基因植物使用的安全標記基因123
二、轉基因植物中抗性基因的剔除126
三、展望130
第七節 理性認識轉基因植物的安全問題130
一、轉基因植物食品的安全問題130
二、轉基因植物的生態安全問題132
參考文獻135
