檢測細胞凋亡法
目的
利用細胞克隆技術進行劑量－存活曲線分析，末端脫氧核苷醯轉移酶法檢測細胞凋亡，免疫細胞化學法分析bcl－2和PCNA基因表達。結果：0.2mg/mlKLT組D0值為90.44cGy，空白對照組和空白乳組D0值分別為131.09cGy和139.40cGy,統計學處理P＜0.05。0.2mg/mlKLT處理GRC-1細胞後，M1區陽性細胞為89.76％,空白乳組為1.02％。0.2mg/mlKLT組GRC-1細胞bcl-2和PCNA基因表達的標記指數（LI)分別為6.60％和15.2％,空白乳組LI分別為25％和0％,統計學處理差異顯著（P＜0.01)。結論：0.2mg/mlKLT具有明顯提高GRC-1細胞放射敏感性的作用，其作用機制是誘發GRC-1細胞凋亡,抑制GRC-1細胞bcl-2基因表達和上調PCNA基因表達。
末端脫氧核苷醯轉移酶法（TUNEL法）檢測細胞凋亡
採用APO-DIRECTKit進行細胞的定量和定性分析〔3〕。細胞接近指數生長期時，更換培養液，其中一瓶加空白乳劑10μl/ml，一瓶加KLT0.2mg/ml。繼續培養48小時，常規消化細胞，製成1×106細胞懸液。PBS緩衝液洗二次，5％多聚甲醛固定15分鐘，PBS洗一次，加TUNEL標記混合染液50μl，37℃溫浴1小時，PBS洗一次，加碘化丙錠（PI)20μl室溫避光反應30分鐘，流式細胞儀檢測（FACSort)，利用CellQuest軟體處理結果，每次實驗均設陰性和陽性對照。
