基因分離方法

基因分離方法是直接從生物基因組中分離出特定基因的方法。目前主要使用三種方法。鳥槍法：使用限制性內切酶在特異的序列上將DNA雙鏈切成平均長度為幾千個鹼基對的混雜片段。這些片段帶有粘性末端，與具有相同粘性末端的載體質粒相結合形成重組體。用此重組體群轉化受體細胞，再選出帶有目的基因的轉化細胞。通過增殖，可使分離到的目的基因得以擴增。

對於高等動物的基因組，用限制性酶切產生的片段很多，單用鳥槍法難於分離出目的基因。可先用凝膠電泳、逆相層析等方法把片段按大小分成幾組，再分別用鳥槍法分離。用mRNA或cDNA釣取目的基因：將某種蛋白的mRNA或cDNA與固相載體相連線，再與酶切的變性DNA片段或部分變性的雙鏈DNA片段相結合，洗去雜質DNA，從而獲得含有此蛋白基因的DNA片段。利用物理性質差別從總體DNA分離特異的基因：某些基因在鹼基組成上與總體DNA有明顯差別，因而在CsCl密度梯度離心中，相應的DNA片段可形成區別於主要DNA帶的一衛星帶，也可將酶切的DNA片段，用電泳法按大小加以分離，然後用所需基因的RNA進行原位雜交，從而得到包含所需基因的片段。運用上述方法目前分離到的基因為數不多，主要是因為生物體內基因數目龐大，而各種基因的含量很小，基因間的物理化學性質差異微小，因此造成基因分離困難。