如果吖啶環上的取代基能與吖啶環上的C-9 和H2O2(過氧化氫)形成不穩定的二氧乙烷(此二氧乙烷可迅速分解為CO2 和電子激發態的N - 甲基吖啶酮,當回到基態時發出光子),則這類取代吖啶化合物可做為化學發游標記物。
根據取代基的不同,常用作化學發游標記物的吖啶取代物分為兩類:吖啶酯和吖啶磺醯胺。它們的結構中都有共同的吖啶環。 它們的發光機理相同:在鹼性H2O2 溶液中, 分子受到過氧化氫離子進攻時, 生成不穩定的二氧乙烷, 此二氧乙烷分解為CO2 和電子激發態的N - 甲基吖啶酮, 當其回到基態時發出最大發射波長為430nm 的光子。這類化合物從發光的機理來說特點是: ①發光反應中在形成電子激發態中間體之前, 聯結於吖啶環上的不發光的取代基部分從吖啶環上脫離開來, 即未發光部分與發光部分分離, 因而其發光效率基本不受取代基結構的影響。②吖啶酯或吖啶磺醯胺類化合物化學發光不需要催化劑, 在有H2O2 的稀鹼性溶液中即能發光。因此套用於化學發光檢測具有許多優越性。優點主要有:①背景發光低,信噪比高;②發光反應 干擾因素少;③光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大;④ 易於與蛋白質聯結且聯結後光子產率不減少;⑤標記物穩定( 在2 - 8 ℃下可保存數月之久)。因此吖啶酯或吖啶磺醯胺是一類非常有效、非常好的化學發游標記物。
這類化合物的發光為閃光型,加入發光啟動試劑後0. 4s 左右發射光強度達到最大, 半衰期為0. 9s 左右。
吖啶酯或吖啶磺醯胺類化合物套用於化學發光免疫分析(CLIA),通常採用的體系是Acridinium ester/ H2O2 系統。 即用吖啶酯或吖啶磺醯胺標記抗體或抗原, 用HNO3+ H2O2 和NaOH 作發光啟動試劑。有些在發光啟動試劑中加入Triton X - 100 , CTAC , Tween - 20 等表面活性劑以增強發光。
常用的吖啶酯和吖啶醯胺類化合物結構以及發光反應步驟參見附圖。
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