用SphadexG-25凝膠柱,分離一含有溶質分子大小不同的樣品溶液,並繪出洗脫曲線。通過實驗了解並熟悉凝膠層析的原理和實際套用。凝膠層析的關鍵在於建立液固相平衡,然後以合適的洗脫速度將不同物質分離流出。溫度高有利於快速建立液固相平衡。但是,溫度高也造成溶質在液體中會擴散太快,導致分離效率降低。
實驗原理
凝膠滲透層析就是按照溶質分子的大小不同而進行分離的一種層析技術。當溶質分子大小不同的樣品溶液通過凝膠柱時,由於凝膠顆粒內部的網路結構具有分子篩效應,分子大小不同的溶質就會受到不同的阻滯作用。分子量大的因不易滲入網路,被排阻在顆粒之外,因而所受到的阻滯作用小,1.凝膠顆粒2.中分子3.小分子4.大分子先流出層析床,分子量小的因能滲透到網路圖1、凝膠滲透層析原理示意圖內部洗脫流程長,因而所受到的阻滯作用大,後流出層析床,這樣就可以達到分離的目的。
實驗儀器、器材與裝置
1.實驗儀器
(1)HL-2恆流泵(上海青浦滬西儀器廠)
(2)HD21C—A核酸蛋白檢測儀(上海康華生化儀器製造廠)
(3)方正筆記本電腦
(4)HW-2000型色譜工作站(南京千譜軟體有限公司)
(5)CT—22採集器
(6)1000ul移液器(北京青雲航空儀表有限公司)
(7)鐵架台(上海康華生化儀器製造廠)
2.實驗器皿
(1)層析柱(長20cm,內徑1.0cm)
(2)量筒10ml(×1)
(3)燒杯250ml(×3)
(4)燒杯50ml(×1)
(5)玻璃棒
(6)滴管
(7)吸耳球
(8)記號筆
(9)十字夾
(10)直尺