凍融法，採用反覆冷凍與融化時由於細胞中形成了冰晶及剩餘液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。
簡介
凍融法：將待破碎的細胞冷至－15℃到－20℃，然後放於室溫(或40℃)迅速融化，如此反覆凍融多次，由於細胞內形成冰粒使剩餘胞液的鹽濃度增高而引起細胞溶脹破碎。
套用
酶的提取溶劑可以用水、一定濃度的乙醇、乙二醇、丁醇和稀鹽溶液、緩衝溶液等；也可以用稀鹼或稀酸溶液，如用稀硫酸提取胰蛋白酶，用稀鹽酸提取胃蛋白酶。溶劑用量一般為原料重量的1～5倍。攪拌可加速提取，但轉速不宜太快，否則會產生泡沫而難以過濾或使酶變性。多數酶的提取要在50C以下操作，但有的酶在較高溫度下提取更好，如胃蛋白酶在450C提得收率較高，一般可在一5～＋400C間適當選擇。提取液的pH應在酶的穩定pH範圍內，並應遠離其等電點的pH為宜，如蛋白酶選用pH 2．5～3，0，胰蛋白酶和α一糜蛋白酶則用0．25 N硫酸提取。若在中性或鹼性提取時，最常用的是0．15 mol/L氯化鈉、0.02～0．05mol/L磷酸緩衝液、0．02-0.05 mol/L焦磷酸緩衝液。正丁醇的親脂性強，能透入酶的脂質結合物中，又兼有親水性，有類似表面活性劑的作用，適用於提取“結酶”。
