1．分析目標化合物
農藥等成分物質 分析目標化合物
二氫鏈黴素和鏈黴素 二氫鏈黴素和鏈黴素
壯觀黴素 壯觀黴素
新黴素 新黴素
2．儀器設備
高效液相色譜—質譜儀。
3．試劑
除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。
七氟丁酸：七氟正丁酸
庚磺酸鈉：1－庚磺酸鈉（特級）
4．標準品
鹽酸壯觀黴素：本品1.000mg含603μg以上效價的壯觀黴素。
硫酸二氫鏈黴素: 本品1.000mg含720μg以上效價的二氫鏈黴素。
硫酸鏈黴素:本品1.000mg含718μg以上效價的鏈黴素。
硫酸新黴素: 本品1.000mg含680μg以上效價的新黴素。
5．試驗溶液的製備
a 提取方法
①肌肉、脂肪、肝臟和腎臟
肌肉：儘可能除去脂肪，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
脂肪：儘可能除去肌肉，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
肝臟和腎臟：攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌3分鐘後，以每分鐘3000轉離心分離10分鐘，脫脂棉過濾。
②奶
稱取5.00g樣品，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌3分鐘後，用振盪器激烈振盪5分鐘，以每分鐘3000轉離心分離10分鐘，脫脂棉過濾。
③蛋
除去蛋殼，充分均勻後，稱取其5.00g，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌均勻後，以每分鐘3000轉離心分離10分鐘，脫脂棉過濾。
b、淨化方法
在十八烷基甲矽烷基化矽膠小柱(500mg)中，依次注入5mL甲醇和10mL水，捨去流出液。柱中依次注入a 提取方法所得到的溶液和5mL水，流出液中加入2mL 0.1mol／L庚磺酸鈉。柱中再依次注入5ml甲醇和10mL水，捨去流出液。依次注入前面加入了庚磺酸鈉的溶液和5mL水，捨去流出液。柱中注入10mL甲醇，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去甲醇。殘留物中加入1.0mL乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液（1：9）混合溶液溶解，此為試驗溶液。
6、操作方法。
a 定性試驗
按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。
操作條件
柱填充劑：十八烷基甲矽烷基化矽膠。
柱：內徑1.0～6.0mm、長10～150mm不鏽鋼管。
柱溫：40℃
流動相：乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液(1：9)混合溶液。調整流速使壯觀黴素約10分鍾流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的試驗條件所得的試驗結果，峰高法或峰面積法定量。
7．定量限
二氫鏈黴素：0.02 mg/kg
鏈黴素： 0.02 mg/kg
壯觀黴素： 0.02 mg/kg
新黴素： 0.02 mg/kg
8．注意事項
（1）試驗溶液的製備
淨化方法採用的十八烷基甲矽烷化矽膠小柱，應預先採用標準品在保證確定的保持、溶出性能和淨化效果時，確證二氫鏈霉素定量限在0.02mg/kg以下；鏈黴素定量限在0.02mg/kg以下；壯觀黴素定量限在0.02mg/kg以下；新黴素定量限在0.02mg/kg以下。另外，用標準品進行添加回收試驗，確證十八烷基甲矽烷化矽膠小柱的淨化效果和回收率（90～100％）。
（2）標準溶液的製備
① 將相當於二氫鏈黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為二氫鏈黴素的標準原液（二氫鏈黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。
②將相當於鏈黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為鏈黴素的標準原液（鏈黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。
③將相當於壯觀黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為壯觀黴素的標準原液（壯觀黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。
④將相當於新黴素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為新黴素的標準原液（新黴素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。
⑤ 用甲醇遞減稀釋二氫鏈黴素、鏈黴素、壯觀黴素和新黴素各標準原液，作為製作標準曲線的標準溶液。
