概念
mRNA:即messenger RNA 信使RNA是由DNA經由轉錄而來,帶著相應的遺傳訊息,為下一步轉譯成蛋白質提供所需的訊息。在細胞中,mRNA從合成到被降解,經過了數個步驟。在轉錄的過程中,第二型RNA聚合酶從DNA中複製出一段遺傳訊息到mRNA前體pre-mRNA上。在原核生物中,除了5'加帽之外mRNA並未被進一步處理而經常是邊轉錄邊轉譯。在真核生物中,轉錄跟轉譯發生在細胞的不同位置,轉錄發生在儲存DNA的細胞核中,而轉譯是發生在細胞質中。
轉錄組學(transcriptomics)是在基因組學後新興的一門學科, 即研究特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA(包括mRNA和非編碼RNA)的類型與拷貝數。Illumina提供的mRNA測序技術可在整個mRNA領域進行各種相關研究和新的發現。mRNA測序不對引物或探針進行設計,可自由提供關於轉錄的客觀和權威信息。研究人員僅需要一次試驗即可快速生成完整的poly-A尾的RNA完整序列信息,並分析基因表達、cSNP、全新的轉錄、全新異構體、剪接位點、等位基因特異性表達和罕見轉錄等最全面的轉錄組信息。簡單的樣品製備和數據分析軟體支持在所有物種中的mRNA測序研究。
測序流程
1 )樣本準備( 3days )
圖1所示。
2 )上機測序 1X40 ( single run , 50h ), 2X80(PE , 180h) , 2X100(PE , 220h) , 2X120(PE , 260h) , 2X150(PE , 320h)
3 )圖像識別, Basecalling ,過濾接頭序列,檢測可能的樣品污染。