H/D Exchange Method
Pulsed-Amide H/D Exchange Method
1.Pulsed-Amide H/D Exchange Method
蛋白質骨架上面的質子在未被保護的情況下（暴露在溶劑環境中，不受自身其他氧、氮原子中的孤對電子的影響）會與重水中的氘發生質子交換。
>N-H + D2O f >N-H + DOH
蛋白處在開摺疊得狀態時，發生氕氘交換，之後檢測蛋白重新摺疊起來的動力學過程。
對於大多數蛋白而言，兩端的helices骨架上的60%質子在前20ms的時間內形成摺疊，而剩下的40%的質子在接下來的100ms和10s內形成摺疊。
具體實驗過程：
A)在蛋白樣品中加入變性劑，使得蛋白處在開摺疊的狀態下，並且使得蛋白中的全部質子交換成氘pD6.0（時間需要3s以上）；
B)在上述的樣品中加入H2O（pH6.0可以是酸性溶劑），稀釋變性劑濃度，使得蛋白樣品開始重新摺疊。
C)加入H2O鹼性溶劑pH 9.0，此時質子交換時間在1ms以內。
D)當蛋白重新摺疊完之後，用NMR或者MS檢測蛋白結構
