鳥槍法克隆

鳥槍法克隆

用ＢａｍＨ１和ＣＩＰ處理ｐＣＢ２０質粒，Ｓａｕ３Ａｌ部分降解枯草桿菌抗阿黴素突變株染色體ＤＮＡ，Ｔ４連線酶連線載體和ＤＮＡ片斷，構成表達文庫。用這個文庫分別轉化枯草桿菌ＢＤ２２４菌株感受態細胞和原生質體。

介紹

鳥槍法克隆

對某基因組文庫全部克隆片段進行末端序列測定中未測到的鹼基數，即缺口(gap)，與已測定的總鹼基數相關。隨著已測定鹼基數的增加，缺口的總鹼基數目會按照泊松公式的一個推論（P=e-m）迅速減小。其中P為基因組中某個鹼基未被測定的機率，m為所測定的鹼基數與基因組大小相比的倍數。m越大P值越小。當m值達到5（即隨機測定的鹼基數達到基因組5倍時），基因組中未測定的鹼基數為基因組總鹼基數的0.67%(e-5=0.0067)。對流感嗜血桿菌這樣大的基因組(1.83Mb)，可能留有128個平均長度為100bp的缺口。