高保真Taq酶

高保真Taq酶保真性的一個通用標準是錯配率,錯配率越低保真性越好 普通Taq酶的錯配率在10-5鹼基/循環數,而高保真Taq酶錯配率可降到10-6數量級,大大降低了出錯的可能性;它適合對PCR保真性要求較高的實驗,如基因篩選、測序、突變檢測等 g活性的酶與普通Taq酶(用於提高擴增效率)混合起來;另一類是單一型的高保真酶。

高保真Taq酶保真性的一個通用標準是錯配率,錯配率越低保真性越好。

普通Taq酶的錯配率在10 鹼基/循環數,而高保真Taq酶錯配率可降到10 數量級,大大降低了出錯的可能性;它適合對PCR保真性要求較高的實驗,如基因篩選、測序、突變檢測等。

高保真Taq酶的保真原理是:高保真Taq酶具有3'到5'核酸外切酶的活性,PCR擴增途中如果產生了錯配的鹼基,它可以將其切掉,從而保證了擴增的準確性;需要提醒的是由於此酶具有核酸外切酶功能,往往擴增效率低一些,有的還會降解引物,而且產物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。

高保真Taq酶的外切活性會導致PCR反應之後不會加尾,所以如果要進行TA克隆,要先進行PCR產物回收(否則影響加尾),然後回收產物用普通Taq酶72℃保溫一段時間,從而利用普通Taq酶加尾的活性。

目前主要有2類產品:一類是混合型的高保真酶,將帶有Proofreading活性的酶與普通Taq酶(用於提高擴增效率)混合起來;另一類是單一型的高保真酶,這種酶本身有校讀功能Proofreading。

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