概述
肌鈣蛋白是肌肉收縮的調節蛋白,由三個結構不同的亞基組成,即肌鈣蛋白T(TnT)、肌鈣蛋白I(TnI)和肌鈣蛋白C(TnC),它附在收縮的橫紋肌細微組織上,TnI是一種結構蛋白,它與肌動蛋白及原肌球蛋白互相作用。TnI與肌動球蛋白在靜止狀態時相結合,抑制肌動球蛋白的ATP酶(ATPase)活性。TnC有四個能結合鈣離子的結合點,當它與細胞內的鈣離子結合時,能導致整個肌鈣蛋白構造上的變化。肌鈣蛋白放鬆了肌動球蛋白,讓肌動球蛋白與肌漿球蛋白互起作用,而造成肌肉收縮。肌鈣蛋白具有的3種同分異構體,其中兩種同分異構體是骨骼肌所特有的,一種同分異構體是心肌所特有的,這3種肌鈣蛋白的同分異構體存在著結構上的差異。心肌中的T和I亞基結構不同於其他肌肉組織,心肌鈣蛋白T、I(CTnT、CTnI)由於分子量小,分別為37000D和24000D,所以發病後血中濃度迅速升高,目前已得到抗CTnT和CTnI的特異抗血清,套用免疫層析與酶免技術可進行快速檢測與定量測定,具有快速、靈敏、特異等特點。
別名
TnI;TnT
醫學檢查
檢查名稱
血清TnI和TnT
分類
血液生化檢查 > 蛋白質測定
化驗取材
血液
原理
(1)心肌鈣蛋白T、I的快速檢測:套用免疫層析方法測定樣品中的特異抗原(CTnT、CTnI)。測試時滴加血清樣品於樣品槽,樣品通過毛細管效應沿試紙膜運動,如果樣品中含有特異抗原,試驗部位就出現色帶,在對照區域內應該有另一顏色條帶作為實驗對照。
(2)心肌鈣蛋白T的ELISA法測定:生物素與親和素作用下的雙抗體夾心ELISA,用鏈霉親和素-生物素化的抗TnT單克隆抗體作包被物,依次於樣品中TnT抗原和酶標TnT單克隆的抗體反應,然後加入底物色原。酶催化底物顯色,由系列TnT標準制定的標準曲線,定量測定CTnT含量。
試劑
(1)心肌鈣蛋白T、I的快速檢測:CTnT免疫層析試紙條(德國寶靈曼公司專利)。
CTnI免疫層析試紙條(進口)。
(2)心肌鈣蛋白T的ELISA法測定:
①生物素-親和素CTnT單克隆抗體包被板。
②孵育緩衝液。
③濃縮洗滌液。
④酶標結合物。
⑤CTnT標準品。
⑥底物色原:ABTS(二氨2,2疊氮)。
操作方法
(1)心肌鈣蛋白T、I的快速檢測:
①將包裝紙打開,標記上樣品編號。
②加5~6滴血清樣品到樣品槽中。
③在10~15min內觀察色帶出現情況。
附註:
①試紙條只能用1次,重複使用無效。
②試紙條試驗區和對照區均不出現色帶,取另一試紙條重複檢測仍無結果,則表示試紙條失效。
③免疫層析技術測定CTnT、CTnI適合床邊快速試驗,但只是定性或半定量,要真正了解病情嚴重程度及選擇治療措施還需定量測定。
(2)心肌鈣蛋白T的ELISA法測定:
①在包被板中分別加入標準血清,對照血清和病人標本於相應的孔內各50μl。
②每孔各加孵育緩衝液50μl,並輕輕混勻。
③室溫下孵育60min後洗滌三次,10min內完成。在吸水紙上用力拍打微孔。以除去殘留水滴。
④每孔各加入酶結合物100μl,輕輕混勻。
⑤倒空微孔板中的孵育液,用洗滌液將微孔洗三次,在吸水紙上用力拍打微孔,以除去殘留水滴。
⑥將200μl色原底物溶液加入相應的孔中,避光,輕輕混勻,靜置30min。
⑦用酶標儀在10min內,於405nm和630nm雙波長下測定吸光度值(OD值)。
附註:
①CTnT待測標本最好用血清,不要用抗凝血漿,因為抗凝劑如:肝素、EDTA等對CTnT有影響。
②由於CTnT是心肌細胞損傷釋放出來的,所以儘量避免標本溶血,如果標本溶血很可能造成檢測結果增高。
③配製好孵育液不要冷凍保存,應放在2~8℃冷藏。
④實驗前應注意試劑有無失效,如變質,其顏色加深。
⑤為了提高CTnT檢測的可靠性,應注意加樣的準確及其他操作過程,比色最好選用雙波長。
正常值
乾片法:TnI陰性 免疫法:TnT0~0.15μg/L 。
化驗結果意義
升高:心肌缺血損傷,如心肌梗死、急性心絞痛、不穩定型心絞痛、心臟手術後等。心肌損傷後、血中出現TnI、TnT時間最早、持續時間長,因此TnI、TnT是心肌損傷的一個較特異和較靈敏的指標,TnI較TnT更敏感。
(1)急性心肌梗死(AMI),發病後血中濃度很快增高,GTnT、CTnI,3~6h超過參考值上限值,GTnT 10~24h達峰值,10~15天恢復正常。CTnI 14~20h達峰值,5~7天恢復正常。即出現早,和CK-MB相當或稍早;消失慢,持續時間超過LD1,診斷的視窗期特別長,兼有CK-MB和LD1的優點。靈敏度GTnT為50%~59%(0~6h),CTnI為6%~44%;特異性GTnT為74%~96%,CTnI為93%~99%。據報導GTnT在診斷AMI時比CK-MB更為靈敏,但有報導在腎臟疾病病人血樣中發現GTnT,所以特異性較差。GTnT比LD1/LD2比率在診斷AMI中更為靈敏,且在腎病及其他疾病患者血液中未發現CTnI,所以CTnI是心臟受損時唯一的特異性標誌物。由於GTnT和CTnI消失慢,所以,可作為心肌梗死後期標誌物。
(2)GTnT和CTnI可作為心臟手術中心肌梗死症狀出現的指示物,當病人接受動脈搭橋手術時,若GTnT和CTnI含量增加,表明出現心肌梗死,而此時CK-MB含量並無變化。
相關疾病
急性心肌梗死