血栓素A2

血栓素A2

血栓素A2主要是由血小板微粒體合成並釋放的一種具有強烈促進血管收縮和血小板聚集的生物活性物質。其生物半衰期約三十秒鐘,迅速代謝為無活性的TXB2。測定這種化合物在血漿組織及其它體液中的濃度,在基礎醫藥學理論研究,臨床血栓形成病的發病預測,療效判斷具有十分重要的意義。由於TXA2和PGI2的不穩定性,難以直接測定。

基本信息

概述

血栓素A2血栓素A2
血栓素A2是一種血栓素,常用作血管收縮劑,可以激活血小板、使其聚集,是治癒組織損傷和發炎的常用藥。但也會導致心絞痛。

血栓素A2主要是由血小板微粒體合成並釋放的一種具有強烈促進血管收縮血小板聚集的生物活性物質。其生物半衰期約三十秒鐘,迅速代謝為無活性的TXB2。血管壁內皮細胞合成和釋放另一種抗血小板聚集和舒張血管的生物活性物質,稱之為前列環素PGI2,生物半衰期約3分鐘,迅速代謝生成6-酮-前列腺素F1a。

血栓素A2通過血栓素A合酶由前列腺素H2產生,在水溶液中極不穩定,30秒內將水解成血栓素B2。因此主要以組織附近的自分泌或旁分泌中介的方式作用。而其相關研究也是用類似物U46619和I-BOP來做的。人體實驗中,依照11去氫血栓烷B2的等級來測試血栓素A2的產生。

在正常生理狀態下血漿或組織中TXA2和PGI2,平衡失調是造成血小板聚集,血管痙攣收縮或血栓形成的原因之一。因此,測定這兩種化合物在血漿組織及其它體液中的濃度,在基礎醫藥學理論研究,臨床血栓形成病的發病預測,療效判斷具有十分重要的意義。由於TXA2和PGI2的不穩定性,難以直接測定。

測定原理

血栓素[3H]-標記物測定法:血栓素A2(TXA2)是由血小板在聚集過程中釋放的一種有強烈收縮血管的活性物質,生物半衰期僅30s,迅速轉化為無活性的血栓素B2(TXB2)。TXB2在生物樣品中濃度甚微。目前均採用放射免疫法測定。樣品中的TXB2經提取純化,和[3H]標記高比放射活性TXB2共同競爭性與限量抗體結合。平衡後加活性炭吸附游離型[3H]-標記物,上清液加至閃爍液中,測β射線的放射性強度。從標準曲線上得出樣品含量。

試劑

(1)抗血清:取TXB2(Sigma公司產品)5mg,高純度BSA5mg,經碳化二亞胺偶聯劑作用,製成TXB2-BSA結合物,免疫家兔獲得特異性抗血清。滴度達1∶32000。臨用前用PBS稀釋。
(2)[3H]-TXB2:比放射活性5.18TBq(140Ci)/mmol,置-20℃以下保存,臨用前取37KBq(1μCi)加至10.5mlPBS中。
(3)標準TXB2貯存液(1.5μg/ml):用無水乙醇配製,放-20℃可長期保存。
(4)標準TXB2工作液:取標準貯存液2μl(3.2ng)至12mm×100mm管中,氮氣吹乾,加2mlPBS溶液,另取試管6隻,各加PBS1ml,將標準液作倍比稀釋,此系列標準濃度為25~1600pg/ml。臨用前配製。
(5)PBS、乙酸乙酯,分離劑和閃爍液配製同前列腺素測定法。

操作方法

血栓素A2血栓素A2
(1)樣品提取同前列腺素測定法。
(2)取8mm×75mm玻璃管,總計數管(T)加PBS300μl,非特異結合管(NSB)加PBS200μl,零標準管(S0)加PBS100μl,標準曲線管(S1~7)加不同濃度標準工作液100μl,測定管加經純化樣品液100μl。
(3)向S0、S1~7和測定管加稀釋抗血清100μl,放4℃6~12h。
(4)向所有管各加[3H]-TXB2工作液100μl,放4℃6~12h。
(5)除T管外,各加活性炭分離劑100μl,混勻後放4℃15min,離心3500r/min(4℃)15min。
(6)將上清液全部傾出至預先加有11ml閃爍液的計數瓶中,充分混合,放置12h後在液體閃爍計數器上測量放射性。
(7)在半對數坐標紙上以LogitB/B0為縱坐標,各標準管TXB2(pg)為橫坐標,按直線回歸法繪製標準曲線,然後依樣品管的LogitB/B0值從標準曲線上求出樣品管濃度,如液體閃爍計數器帶有數據處理系統,可直接給出標準曲線,有關參數及樣品管濃度。

正常值

血漿:男性:(132±55)ng/L;女性:(116±30)ng/L。

臨床意義

血栓素水平變化見於:動脈粥樣硬化、心絞痛、冠心病、糖尿病、高脂血症等增高,TXA2/PGI2比值升高易於導致血小板聚集、血栓形成,促使動脈粥樣硬化和冠心病。出血、損傷和內毒素休克動物血漿中TXB2顯著增加,這與休克時肺循環阻力升高有關。
慢性腎衰患者尿中TXB2和6-酮-PGF1α下降。腎血管性高血壓、腎病綜合徵和BATTER綜合徵患者尿中PG亦有顯著性變化。
惡性腫瘤患者動脈組織中TXA2有所改變,PGI2、TXA2正常時,能阻止腫瘤細胞侵襲血小板進而粘附在血管表面。抑制血小板TXA2生成和增加血管內皮細胞PGI2生成的因素有抗腫瘤轉移作用。

相關搜尋

熱門詞條

聯絡我們