自殺載體

自殺載體是指能在一種宿主內複製但在另一宿主中卻不能的質粒或噬菌體。又分別稱之為自殺質粒和自殺噬菌體。
自殺載體的一種簡單形式是窄宿主範圍質粒，例如那些基於CloE1樣複製子的質粒。這類質粒只能在腸桿菌及關係很近的菌種中複製。其它形式的條件性複製載體有一個溫度敏感複製子，或在必需基因內有一無義突變。自殺質粒應具備三個條件：⑴自殺質粒在受體菌內不能複製。⑵自殺質粒必須帶有一個在整合到染色體內以後，可供選擇的抗性標記。⑶自殺性質粒帶有易於克隆的多克隆位點。除一些特殊構建的用於G－的自殺質粒外，對於那些易於轉化的G＋而言，稍加改造的用於G－的質粒就可用作自殺質粒，因為G－的質粒在G＋中不能複製。因此只需在一些G－的質粒上加上能在G＋中表達的抗性基因即可。保證了以上幾點，自殺載體完全可以自己構建，但是在構建時，要注意以下方面：1、連線質粒載體和DNA插
入片斷時：（1）初次實驗的可以建立幾種不同的連線體系，比如插入片段與載體分子數比率可以為3：1，1：1，或1：3。（2）可以嘗試三種溫度和時間的連線如4度，過夜；15度，4－6小時；25度，1小時。2、細菌轉化和篩選時：（1）如果是感受態細胞，－80度儲存的在5－6周后,轉化率低。可用一已知標準閉環質粒鑑定感受態細胞的轉化能力；（2）用無DNA
轉化物的感受態細菌鋪板，如果有菌落生長，說明其中抗生素濃度不夠。這種方法使用的載體是條件性複製載體：能夠在供體菌中複製，不能在受體菌中複製。