概念
紙層析法又稱紙色譜法。以紙為載體的色譜法。
.色譜系統
固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為不與水相溶的有機溶劑；也可使紙吸留其他物質作為固定相，如緩衝液，甲醯胺等。
操作方法
將試樣點在紙條的一端，然後在密閉的槽中用適宜溶劑進行展開。當組分移動一定距離後，各組分移動距離不同，最後形成互相分離的斑點。將紙取出，待溶劑揮發後，用顯色劑或其他適宜方法確定斑點位置。根據組分移動距離（Rf值）與已知樣比較，進行定性。用斑點掃瞄器或將組分點取下，以溶劑溶出組分，用適宜方法定量（如光度法、比色法等）。
紙層析法套用
在環境分析測試中，有時用紙層析法分離試樣組分，它用於一些精度不高的分析，如3，4-苯並芘。但不如GC、HPLC套用普遍。
實驗
儀器藥品
大試管台天平研缽(配帶孔紙板,防止丙酮揮發) 量筒燒杯漏斗
軟木塞濾紙丙酮（可用無水乙醇替代）四氯化碳無水硫酸鈉碳酸鈣石英砂
操作步驟
1．稱取新鮮葉子2g，放入研缽中加丙酮5ml，少許碳酸鈣(防止葉綠素被破壞）和石英砂（幫助研磨），研磨成勻漿，再加丙酮5ml，然後以漏斗過濾之，即為色素提取液。
2．取準備好的濾紙條（2×20cm），將其一端剪去兩側，中間留一長約1.5cm，寬約0.5cm的窄條，並在濾紙剪口上方摺疊出一條直線，作為畫濾液細線的基準線。
3．用毛細吸管沾少許濾液在折線上描繪4~5次，注意要畫得勻、直、細，每次畫完細線要等其自然變乾後再畫第二根線。4．在大試管中加入四氯化碳3梍5ml及少許無水硫酸鈉（即層析液）。然後將濾紙條固定於軟木塞上，插入試管內，使窄端浸入溶劑中（色素點要略高於液面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁），蓋緊軟木塞，直立於陰暗處進行層析。
經過0.5—1小時後，觀察分離後色素帶的分布。最上端橙黃色為胡蘿蔔素，其次黃色為葉黃素，再下面藍綠色為葉綠素a，最後的黃綠色為葉綠素b。
普通高中相關實驗
植物葉綠體中色素的提取與分離
用具：剪刀一把、乾燥的定性濾紙、50ml的燒杯及100ml的燒杯各3個、白紙3張、試管架一個、研缽一個、玻璃漏斗一個、尼龍布或紗布、毛細血管一隻、藥勺一個、10ml量筒一隻，天平一隻，試管3支、紙板一塊、棉塞3個、培養皿3個、刻度尺、注射器一隻、蓋玻片
試劑：丙酮、無水乙醇、層吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化矽、碳酸鈣、碳酸鈉
材料：新鮮的菠菜葉、青菜葉、大葉黃楊葉片
背景資料：
1、葉綠素等是脂溶性的有機分子，根據相似相溶的原理，葉綠素等色素分子溶於有機溶劑而不溶於有極性的水。故在研磨和收集葉綠色素時要用丙酮或乙醇等有機溶劑而不用水。
2、葉綠素分布於基粒的片層薄膜上，加入少許二氧化矽是為了磨碎細胞壁、質膜、葉綠體被膜和光合片成，使色素溶解於丙酮中。
3、破碎的細胞中含有草酸等有機酸，葉綠素分子中含有的Mg元素處於不穩定化合態，鎂離子與有機酸結合將導致色素分子破壞。加入少許碳酸鈣使得鈣離子與有機酸結合，減少鎂離子的轉移，防止研磨時葉綠體色素的破壞。所以在研磨時加入適量的碳酸鈣，同時加入碳酸鈉的道理亦如此。
4、在過濾時選用脫脂棉或紗布，而不用濾紙。原因主要有下：（1）色素分子比較大，不容易透過濾紙；（2）濾紙有較強的吸附性而使色素吸附在濾紙上，從而降低色素濃度，影響實驗效果；（3）葉綠素是脂溶性，根據相似相容的原理，脫脂棉可以減少實驗過程中色素的流失，增強實驗效果。
5、根據物理學中的毛細現象，畫濾紙細線前濾紙必須經過乾燥處理，是為了阻止水分子堵塞濾紙中的毛細管而影響層析液的擴散。但如果用火烤的話，會使濾紙纖維變形同時破壞啦毛細管，而影響層析液的擴散。
6、由於液面的不同位置表面張力不同，紙條接近液面時，其邊緣的表面的張力較大，層析液沿濾紙邊緣擴散過快，而導致色素帶分離不整齊的現象。故而，在插入層析液的濾紙條一端剪去兩個角。
7、為了防止濾紙條倒入層析液中而使層析實驗失敗。同時，防止因液體表面張力引起層析液沿濾紙條向上的“壁流”而導致色素溶解。
8、色素分離的原理：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸20%左右的水），有機溶劑如乙醇等為流動相，色素提取液為層析試樣。把試樣點在濾紙的濾液細線位置上，當流動相溶劑在
濾紙的毛細管的作用下，連續不斷地沿著濾紙前進通過濾液細線時，試樣中各組份便隨著流動相溶劑向前移動，並在流動相和固定相溶劑之間連續一次又一次的分
配。結果分配比比較大的物質移動速度較快，移動距離較遠；分配比較小的物質移動較慢，移動距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達到
分離的目的。
