目的基因的檢測與鑑定

目的基因的檢測與鑑定

基因工程(genetic engineering)又稱基因拼接技術和DNA重組技術。

基因工程

是以分子遺傳學為理論基礎,以分子生物學和微生物學的現代方法為手段,將不同來源的基因按預先設計的藍圖,在體外構建雜種DNA分子,然後導入活細胞,以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產新產品。

基因工程技術為基因的結構和功能的研究提供了有力的手段。

檢測表達

目的基因導入受體細胞後,是否可以穩定維持和表達其遺傳特性,只有通過檢測與鑑定才能知道。這是基因工程的第四步工作。

目的基因的檢測與鑑定 目的基因的檢測與鑑定

以上步驟完成後,在全部的受體細胞中,真正能夠攝入重組DNA分子的受體細胞是很少的。因此,必須通過一定的手段對受體細胞中是否導入了目的基因進行檢測。檢測的方法有很多種,例如,大腸桿菌的某種質粒具有青黴素抗性基因,當這種質粒與外源DNA組合在一起形成重組質粒,並被轉入受體細胞後,就可以根據受體細胞是否具有青黴素抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。重組DNA分子進入受體細胞後,受體細胞必須表現出特定的性狀,才能說明目的基因完成了表達過程。

標記基因

標記基因的作用在於便於檢測目的基因的情況。因為標記基因和目的基因同位於運載體上,要導入都導入,要表達則都會表達。一般標記基因的DNA序列是已知的,若選用抗氨苄青黴素基因,則可在目的基因導入後用氨苄青黴素來處理受體細胞,若無異常,則抗氨苄青黴素已合成,說明基因已得到表達。

檢測分三種,首先是通過對標記基因的檢測,通常用DNA分子雜交技術,來檢驗標記基因(目的基因)是否成功的導入受體細胞。

或者用分子雜交技術,來看目的基因導入後是否成功轉錄出信使RNA。

最後可以用抗原-抗體檢驗,來驗證導入基因是否成功表達。

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