異硫氰酸胍

異硫氰酸胍

異硫氰酸胍是一種化學物質,分子式是CH5N3·HSCN。

基本信息

簡稱 GITC

外觀:白色結晶

熔點:115-120℃

PH(4%水溶液):4.5-7.0

紫外吸收(300nm,6M):≤0.1 abs unit

紫外吸收(410nm,6M):≤0.05abs unit

乾燥失重:≤0.5%

用途:用於變性裂解細胞;提取RNA和DNA。無RNA酶和DNA酶活性

TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、 異硫氰酸胍等物質,能迅速破碎細胞並抑制細胞釋放出的核酸酶。

提取

異硫氰酸胍法提取製備模板核酸此法主要用於RNA的提取.標本為組織細胞及血清等.

1.異硫氰酸胍消化液

異硫氰酸胍4mol/L

檸檬酸鈉(PH7.0)25mmol/L

十二烷基肌酸鈉0.5%

β-巰基乙醇0.1mol/L

2.消化方法:用50~100ul細胞懸液及血清,加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻後,或65℃1小時,或室溫放置數分鐘,然後加1/10體積的3mmol/LpH5.2的醋酸鈉緩衝液,再加等體積的酚:氯仿,用力振搖約10s,10000r/min,離心5min,取上清加等體積異丙醇-20℃放置3h後,14000r/min離心15min,沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1~2次,真空乾燥,沉澱用TE緩衝液溶解即可用於逆轉錄PCR擴增,或放-20℃保存。

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