保持中醫藥優勢的需要
幾千年來,中醫在運用天然藥物方面積累了豐富的經驗.比如其中一些天然動植物藥物的粗製品,比如水蛭素,蛇毒抗栓酶類粗製品已經作為我國的傳統醫藥產業.但是當國外採用了分子生物學技術和生物工程,生產出水蛭素,類凝血酶素,既降低了成本,又提高了質量的穩定性.反銷我國和國際市場,對我國傳統醫藥產業形成了巨大競爭.有識之士開始呼籲不能坐視祖國醫學優秀遺產的優勢失去,主張抓緊採用分子生物學研究天然中藥的有效成分,開發新藥,不然勢將失去優勢.通過幾十年的研究,中藥所面臨的問題已經暴露得十分清楚,比如中藥材的質量穩定,占用耕地,有效成分和若干有效成分最佳組合的探索,有效成分得率需要提高,以及服用的安全,方便等均有賴於大量的中藥學基礎研究,而已有的研究表明,分子生物學是十分重要,有效的研究手段. 中藥的研究有賴於中醫基礎的研究,而不加強分子生物學技術對中醫基礎的研究,沒有強大的基礎研究的積累和支撐,藥物的研究,開發將成為無本之木.
繼承和發展中醫基礎理論的需要
中醫藥的作用發揮,臟腑病機的變化,不同治法(具體落實到中藥複方及其有效成分,針灸,推拿等治療方法)的作用環節和最終作用的發揮,均落實到人體基因轉錄與表達的調控.已有的研究表明,中醫藥的取效,往往是通過對基因的轉錄與表達調控實現的.甚至,一些基因缺失或突變所引起的疾病,中醫藥通過對其它有關基因的轉錄調控,進行補償,達到治療疾病的目的.深入研究對於闡明中醫藥的作用機制,闡明生命的調控原理,均具有重要的科學意義.作為對中醫學優秀遺產的繼承和發展,這部分的研究具有廣闊的天地,是中醫基礎理論研究的重頭.
二.分子生物學的主要技術和方法
(一)載體
載體的使用目的:
1)重組基因,以便放大某一基因片段,用於探針,基因功能檢測,報導基因研究等.方法是:把某一DNA片段插入到相應的載體(比如質粒,噬菌體,哺乳類細胞表達載體等),給予擴增,用以標記探針,測序,cDNA庫建立,基因功能檢測等多種分子生物學實驗.因此重組質粒就成為中醫藥實驗研究中最為常規的實驗.
通常,擴增目的DNA主要藉助兩類方法,即PCR技術和載體重組技術,鑒於PCR技術受到酶的性能和方法學等多方面的限制,某些DNA和超過一定長度DNA的擴增會有困難,所以載體重組技術倍受青睞.
2)DDPCR產物的克隆和測序.
3)RACEPCR產物的克隆和測序.
4)構建基因庫,cDNA庫,等.
5)基因功能檢測.
6)基因工程(包括基因治療之類).
1.質粒.質粒是一類雙鏈,閉環的DNA分子,長度為3kb左右,存在於細菌體中,獨立於細菌染色體之外進行複製和遺傳的輔助性遺傳單位.通過改造,使實驗室常用質粒具備了以下幾種特性:1)含有多克隆位點區域,可方便的插入目的DNA片段.2)對細菌的可轉移性,即在實驗中,可將質粒誘導入細菌.3)選擇標記.常用的有抗生素抗性基因.
這樣,一旦質粒進入細菌,便可使該細菌對相應的抗生素產生抵抗能力,在含這一抗生素的瓊脂平板上傳代,如此,便於鑑定質粒誘導入細菌成功與否.4)在細菌體內可獲得較高的拷貝數,例如一種叫pUC的質粒,在單一細菌體中的拷貝數可達500-700個.因此質粒已成為分子生物學中套用最為廣泛的載體.
