特異性洗脫

特異性洗脫
特異性洗脫是指利用洗脫液中的物質與待分離物質或與配體的親和特性而將待分離物質從親和吸附劑上洗脫下來。
特異性洗脫也可以分為兩種：一種是選擇與配體有親和力的物質進行洗脫，另一種是選擇與待分離物質有親和力的物質進行洗脫。前者在洗脫時，選擇一種和配體親和力較強的物質加入洗脫液，這種物質與待分離物質競爭對配體的結合，在適當的條件下，如這種物質與配體的親和力強或濃度較大，配體就會基本被這種物質占據，原來與配體結合的待分離物質被取代而脫離配體，從而被洗脫下來。例如用凝集素作為配體分離糖蛋白時，可以用適當的單糖洗脫，單糖與糖蛋白競爭對凝集素的結合，可以將糖蛋白從凝集素上置換下來。後一種方法洗脫時，選擇一種與待分離物質有較強親和力的物質加入洗脫液，這種物質與配體競爭對待分離物質的結合，在在適當的條件下，如這種物質與待分離物質的親和力強或濃度較大，待分離物質就會基本被這種物質結合而脫離配體，從而被洗脫下來。例如用染料作為配體分離脫氫酶時，可以選擇NAD+進行洗脫，NAD+是脫氫酶的輔酶，它與脫氫酶的親和力要強於染料，所以脫氫酶就會與NAD+結合而從配體上脫離。特異性洗脫方法的優點是特異性強，可以進一步消除非特異性吸附的影響，從而得到較高的解析度。另外對於待分離物質與配體親和力很強的情況，使用非特異性洗脫方法需要較強烈的洗脫條件，很可能使蛋白質等生物大分子變性，有時甚至只能使待分離的生物大分子變性才能夠洗脫下來，使用特異性洗脫則可以避免這種情況。由於親和吸附達到平衡比較慢，所以特異性洗脫往往需要較常的時間和較大的洗脫條件，可以通過適當的改變其它條件，如選擇親和力強的物質洗脫、加大洗脫液濃度等等，來縮小洗脫時間和洗脫體積。