核酸磷酸酯酶
主要作用是催化水解由磷酸作為酸的部分的酯的酯鍵。兩類磷酸酯水解酶即磷酸一酯水解酶和磷酸二酯水解酶的底物分別為磷酸一酯和磷酸二酯。磷酸二酯水解酶催化原磷酸形成的兩個酯鍵中的一個水解,這類酶中最重要的是水解核酸和磷脂中特定的磷酸二酯鍵的那些酶。
簡介
本鹼性磷酸酯酶標記Streptavidin(AP-labeledStreptavidin)也稱AP-Streptavidin、Streptavidin-AP或鹼性磷酸酯酶標記鏈霉親和素,為進口分裝,可以用於生物素(Biotin)標記的抗體、核酸、蛋白或其它生物素標記分子的檢測。具體用途包括Western、ELISA、免疫組化或免疫細胞化學、原位雜、Southern、Northern、EMSA等。
本AP-Streptavidin用高純度的Streptavidin和超純的鹼性而成,確保產生極低的本底和非常高的靈敏度。本產品的濃度為1mg/ml。
Streptavidin的分子量為66kD,可以高度特異性地和生物素(Biotin)結合。Streptavidin和生物素的親和常數為Kd=10-15M。Streptavidin是一個4聚體蛋白,可以同時結合4個生物素分子。Streptavidin的中文名為鏈霉親和素,從Streptomycesadidinii中純化獲得,和雞蛋清來源的Avidin(親和素)在空間結構以及與生物素的親和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是,Streptavidin是一種非糖基化蛋白,並且基本不帶電荷。Avidin的pI=~10.5,在中性pH條件下呈鹼性。由於Streptavidin和Avidin相比在中性條件下不帶電荷,因此Streptavidin的非特異性結合比Avidin低很多,這樣檢測時的非特異性背景就低很多。因此目前在生物素檢測時通常使用Streptavidin替代Avidin。
鹼性磷酸酯酶即alkalinephosphatase(AP),可以在Western、EMSA、Southern或Northern等檢測時催化BCIP/NBT等顯色試劑顯色或催化適當的化學發光試劑產生化學發光。
本鹼性磷酸酯酶標記Streptavidin用於各種常規用途的推薦稀釋比例參考下表,實際實驗操作過程中需根據具體情況適當調節鹼性磷酸酯酶標記Streptavidin的稀釋比例。對於Western,推薦的稀釋範圍為1:2000-10000。
相關資料
為水解磷酸單酯的酶,即狹義的磷酸(酯)酶。根據條件也可將磷酸基向其它醇類轉移。此酶有特異性低可對許多磷酸單酯發生作用者,也有隻對特異的底物發生作用者,後者冠以底物的名稱以與前者區別;前者更根據其最適pH和抑制和活性等性質,而分為下列四型。Ⅰ型(鹼性磷酸(酯)酶,EC3.1.3.1):最適pH=8.6—9.4,pH=7.5—8.5最穩定。在一定程度上Mg2+或其它二價陽離子也可使其活化,可被半胱氨酸和硫化氫等抑制。對磷酸甘油(磷酸酯酶的標準的底物)的α-異構體比β-異構體可更快的分解。在動物組織中廣泛分布,特別是在骨、腸黏膜、腎、乳腺和乳汁中更多;在血清中所見到的認為是來自於肝、小腸及骨組織。在細胞中以與表面膜結合的形式存在;在小腸黏膜上皮細胞的微絨毛膜中具有較高的濃度;腎臟中腎小管上皮細胞也不少。生理功能尚不清楚。在少數的黴菌和也可看到,但高等植物和高等菌類中不存在。Ⅱ型〔酸性磷酸(酯)酶,EC3.1.3.2〕:最適pH=5.0—5.5,pH=5.0—6.0時最穩定。不為Mg2+所活化,氟化物有顯著的抑制作用,SH化合物無影響。對磷酸甘油的特異性與Ⅰ型相同。在高等動物體廣泛分布,但存在的組織與Ⅰ型不同。在人的前列腺中很多,也分泌到精液中;另外在高等植物和菌類具有活性高的酶,在細菌(例如丙酮丁醇梭菌Clostridiumacetobutylicum)中也有此酶。Ⅲ型:最適pH=3.0—4.2,在pH=4.5—5.5時最穩定,中性條件下很不穩定。關於抑制及其它諸性質,因酶原的不同而稍有不同,Mg2+具有抑制作用,氟化物無抑制作用,半氨酸有抑制作用;特異性與Ⅰ型相同。在動物組織中也廣泛存在,肝臟及脾臟中更多。在米糠、酵母菌和黴菌中也有。Ⅳ型:最適pH=5.0—6.0。在pH=6.5—7.5條件下最穩定。Mg2+及Mn2+有顯著的活化作用。對α-磷酸甘油比β異構體可更好地分解。在紅血球、下層酵母菌、麴黴以及許多細菌中均含有此酶。磷酸單脂酶還分:(a)己糖二磷酸(酯)酶;(b)5’-核苷酸酶;(c)醯基磷酸(酯)酶(acylphosphatase):存在於肌肉及肝臟,作用於像乙醯磷酸那樣的低級脂肪酸的酸酐型高能磷酸鍵;(d)己糖-6-磷酸(酯)酶(Hexose-6-phos-phatase),存在於肝臟;(e)磷蛋白磷酸(酯)酶(phosphoproteinphosphatase),可特異地作用於酪蛋白等磷蛋白,存在於雞胚及胃黏膜等。另外也有從磷酸化酶a特異分離磷酶的酶,參與由修飾酶蛋白的活性調節。