背景介紹
微衛星標記(Microsatellite)也稱為短串聯重複序列(STR)或簡單重複序列(SSR),是廣泛分布在真核生物基因組中的簡單重複序列。微衛星位點通常通過PCR擴增和電泳檢測,並根據片段大小分離等位基因進行分析;擴增後的等位微衛星可以用多種方法檢測,傳統方法採用聚丙烯醯胺凝膠電泳加放射顯影或銀染的方法,費時費力效率低。閱微基因基於5年的經驗,利用ABI遺傳分析儀對螢光標記的DNA片段進行檢測,結合分子量內標進行DNA片段長度計算,使STR分型變得高效快捷,結果也更加精確。
服務項目
1.SSR引物開發:通過富集微衛星序列,開發出20-30條具有一定重複特徵的微衛星序列,並且對序列進行多態性和特異性驗證。
2.引物篩選:選取部分代表性樣本,利用普通引物進行PCR擴增,然後利用高解析度晶片電泳或PAGE驗證引物的特異性、擴增效率和基因座多態性等信息。
3.樣本批量擴增:用帶有螢光標記(FAM/HEX/TMR/ROX等)的引物,對批量樣本進行PCR擴增。我公司擁有高通量PCR儀平台,可以滿足大量樣本擴增需求。
4.測序儀檢測:帶有螢光標記的PCR產物進行稀釋後與分子量內標混合,用3730xl等測序儀進行毛細管電泳,並得到原始數據。
5.原始數據分析:編制panel和bin等檔案,使用正版GeneMapper v4.0軟體分析測序儀得到的fsa檔案,並生成PDF圖譜和Excel文檔(包括size、基因分型等信息),
6.群體遺傳學分析:利用生物信息學軟體(POPGENE、MEGA、PHYLIP、ARLEQUIN等)對上述數據進行進一步分析,繪製遺傳連鎖圖譜、分析連鎖不平衡和分析多態性等。
送樣要求
細胞(≥106 )、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、基因組DNA(≥20μl,濃度≥ 50ng/μl);引物信息、片段長度範圍、瓊脂糖電泳圖等。
提供結果
引物、微衛星分析的原始數據以及GeneMapper生成的PDF圖譜、包含片段長度等信息的Excel文檔和進一步的分析結果等。