干擾AFP蛋白表達的shRNA表達載體的構建及活性鑑定
來自： 長治醫學院學報 2007-12-19 08:00:00
作者：張國英;劉明社;趙中夫;張芸;楊慧;武延雋;
摘要：目的:利用含報告基因EGFP的pGenesil-1質粒構建干擾AFP蛋白表達的短髮夾RNA (short hairpin RNA,shRNA)表達的載體,並進行活性鑑定。方法:設計表達短髮夾RNA的互補DNA序列,經退火成雙鏈,克隆至帶有U6啟動子的質粒載體pGenesil-1中,構建重組質粒,轉化大腸桿菌DH5α菌株,擴增,提取質粒,酶切鑑定後測序分析。構建正確的重組質粒經脂質體轉染HepG2細胞,檢測轉染率和培養細胞上清的AFP含量變化,確定重組質粒的活性。結果:構建了靶向AFP蛋白的2個shRNA重組質粒載體pGenesil-1-siAFP1和pGenesil-1-siAFP2。酶切鑑定和測序分析,shRNA編碼序列與設計的片段完全一致,經酶切凝膠電泳證實載體構建成功。重組質粒有效轉染HepG2細胞並顯著抑制AFP表達。結論:成功構建具有活性的、能夠表達shRNA靶向干擾AFP蛋白的2個重組質粒載體。..
副黏病毒V蛋白抗干擾素作用的研究進展
副黏病毒的V蛋白是結構蛋白P基因內使用不同的閱讀框編碼產生的一種非結構蛋白,具有抗干擾素（IFN）的作用。副黏病毒科不同成員間V蛋白的產生機制不同,國內外利用反向遺傳、RNA干擾等技術缺失或抑制V蛋白,通過檢測IFN產生及作用通路上關鍵蛋白的變化情況研究其抗IFN作用機制,發現副黏病毒V蛋白既可直接阻止IFN產生,也可阻斷IFN抗病毒JAK/STAT作用通路。文章對副黏病毒V蛋白、干擾素的產生及其抗病毒作用機制,特別是V蛋白抗IFN作用的研究進展及套用前景做一綜述。 (共4頁)
