尿苷二磷酸葡萄糖

尿苷二磷酸葡萄糖

尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶是催化黃原膠生成的酶類之一,構想通過增加酶量來達到提高黃原膠產量的最終目的。方法：提取基因組DNA作為模板,通過PCR擴增得到酶基因,經DNA體外重組構建表達質粒。結果：實現在大腸桿菌中的表達,並成功轉化黃原膠菌株。轉化過程提示黃原膠菌株可能具有某些特殊性。與文獻報導比較有異同點。

介紹

尿苷二磷酸葡萄糖

建立了一種經濟、簡便的一步酶法，大量合成尿苷二磷酸葡萄糖．在酶法合成中，用UTP代替ATP，並建立了UTP的再生系統；建立了反覆補加法和酶回收法，使酶的利用率達到最高．UDP_[4-^13C]．葡萄糖首次用該法在0．5g規模上合成．總產率為69．7％．UDP-[4-^13C]．葡萄糖的核磁共振(NMR)結果表明，文獻報導的UDPG的^1H和^13C核磁共振譜中葡萄糖4位C的歸屬是錯誤的，從而糾正了文獻中關於UDPG核磁共振譜歸屬中的部分錯位．

黃原膠是由野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris)分泌的胞外雜多糖,是目前產量最高的微生物多糖之一，具有假塑性、溫度和pH穩定性，以及與鹽類良好的相容性,廣泛套用於食品、石油、化工、醫藥等領域［1］。國外關於黃原膠的研究從20世紀60年代起步，國內自70年代開始，包括菌種選育、發酵工藝研究、黃原膠理化性質探討及其免疫學活性分析等。經查閱資料發現，在黃原膠的合成過程中，含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶(uridinediphosphateglucosedehydrogenase,UDPGD)的催化才能生成葡萄糖醛酸，而後者是黃原膠生物合成的前體之一。故此，我們構想以黃原膠菌株基因組DNA為模板,通過合成引物、擴增、克隆得到UDPGD基因，在實現大腸桿菌的表達後，再轉入原黃原膠菌株，希望UDPGD酶量的增加能夠帶來黃原膠產量增加的正效應。文獻報導UDPGD基因全長1338bp，285bp處含PstⅠ切點，740bp處含BamHⅠ切點，編碼445個胺基酸，蛋白相對分子質量48432［2］。經過實驗，我們對UDPGD的研究工作取得了初步結果。