簡介
[英] peripheral blood
正常人外周血中一般看不見幼稚的幹細胞的,只存在有極少量的 造血幹細胞,其含量為0.01%左右。如果幼稚細胞的比例大幅增加,有可能是類白血病。正因為存在0.01%的 造血幹細胞,可利用細胞分離的技術( 血細胞自動分離機),將外周血中含有造血幹細胞的單個核細胞進行分離保存,重複數次達一定細胞數量後,回輸給患者以之代替 骨髓而進行的幹細胞移植,稱為 外周血幹細胞移植。
培養基配製
配製用水
培養基的大部分是水,所以水的質量直接影響培養基的質量。按Waymouth標準,水的電阻應為200萬 歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器製備的
雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
培養基
培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配製。NaHCO3(或HCl)調pH至7.2~7.4,若pH值超
過7.6或遠低於6.8,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
血清
培養中常使用小牛血清(或 胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰櫃存放待用。配製時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由於血清成分複雜、條件不易控制,可選用 無血清培養基。
抗菌素
為防止培養時期細菌的污染,可在培養基中添加適當抗菌素,一般用量與組織細胞培養相同:卡那黴素100單位/毫升,或雙抗--青黴素100單位/
毫升,鏈黴素100微克/毫升。
植物血凝素(PHA)
非增殖期的細胞不能製備染色體,如人 外周血淋巴細胞,但在離體培養過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為 淋巴母細胞而進入有絲分裂。
經實驗測定其分裂高峰分別於培養後44—48小時和68—72小時。
PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數隨其濃度而增加,直至全部 免疫活性細胞均
被激活為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般採用4%濃度為好。