N2和NH4^＋培養下糞產鹼菌固氮酶鐵蛋白圓二色譜及熱力學特性比較
來源：自然科學 / 生物收藏本文章Ｎ２和ＮＨ４＾＋培養下糞產鹼菌固氮酶鐵蛋白的氧化態和還原態的ＣＯ譜及ＭＣＤ譜存在明顯差異。還原態Ａｆ＾２與Ａｆ ２在２１０ｎｍ附近的ＭＣＤ譜完全不同，但它們的氧化態ＭＣＯ譜完合不同，但它們的氧化態ＭＣＯ譜相同，熱力學測定結果表明，在２９８°Ｋ，１．０１３×１０＾５Ｐａ下，Ａｆ２與ＭｇＡＴＰ飽合絡合時的焓變化為－２７．０ｋＪ／ｍｏｌ，自由能變化則為－２０．８ｋＪ／ｍｏｌ，熵變化為－２０．６Ｊｍｏｌ＾
糞產鹼菌,圓二色譜,固氮酶,鐵蛋白_2和NH_4~+培養下糞產鹼菌固氮酶鐵蛋白的生物合成及特性比較--《
植物生理與分子生物學學報》1992年04期
--------------------------------------------------------------------------------
中國知網提供 http://www.cnki.net
套用DEAE-纖維素和凝膠柱層析,分別將N_2和NU_1~+(30 mmol/L)培養的糞產鹼菌固氮酶鐵蛋白(Af2和Af~+2)分離並提純52倍,在SDS-PAGE上呈均一狀態。Af2的比活性達1540 nmol C_2H_4mg~(-1)protein min~(-1),Af~*2無活性。Af2和Af~*2理化性質基本相同,分子量為64.5 kD;均由2個亞基組成,每個亞基分子量為32.5kD;胺基酸種類相同,總殘基數分別為537和553,不含色氨酸;每分子Af2和Af~+2均含有4個Fe原子和4個酸不穩定S~(2-)原子;UV-vis光譜吸收特徵相同;螢光探劑測定結果為:每分於Af2和Af~*2均絡合2個分子MgATP或2個分子MgADP。棕色固氮菌
固氮酶鐵蛋白的研究(四)
尤崇杓,王惠賢,平淑珍,高盟生
套用螢光探劑——螢光醋酸汞和螢光胺研究了棕色固氮菌固氮酶的兩種蛋白組分與MgATP和MgADP的關係。實驗確證該菌鉬鐵蛋白不能與MgATP和MgADP絡合,而鐵蛋白則能。每分子鐵蛋白絡合2個分子MgATP,但至少是絡合2個分子MgADP,反應的部位是在鐵蛋白的巰基上。MgATP和MgADP與鐵蛋白絡合後,引起鐵蛋白構型變化,使鐵蛋白中可與螢光胺反應的氨基量增加。MgATP和MgADP二者與鐵蛋白作用後所得結果相近似。在沒有MgATP存在條件下,鉬鐵蛋白仍能與鐵蛋白相互作用,並在巰基部位上產生變化。對於氨基也有影響。
【作者單位】：中國農業科學院原子能利用研究所 (尤崇杓;王惠賢;平淑珍);中國農 :選用柱層析、電泳和反相高效液相色譜（RP-HPLC）技術製備質譜純棕色固氮菌細菌鐵蛋白（Bacteri-al ferritin ofAzotobacter vinelandii,AVBF）,並採用釋放鐵動力學和肽質量指紋圖譜（Peptide mass fingerprint-ing,PMF）技術分別鑑定AVBF。基質輔助雷射解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）和電泳技術揭示AVBF亞基之間相互作用強度、穩定性和聚合態。AVBF可直接捕獲有機小分子亞甲藍（MB）,其捕獲率為15.0±2.0MB/AVBF,認為介於AVBF亞基單體之間的血紅素參與捕獲MB。較高濃度（40%～50%）的乙腈和丙酮均能使AVBF和鯊魚肝鐵蛋白（Liver ferritin of shark,SLF）釋放不穩定亞基,但在較低濃度（20%～30%）的乙腈條件下,卻需要藉助來源於質譜儀的雷射才能使AVBF或SLF釋放不穩定亞基,並供質譜分析。AVBF亞基之間的相互作用強度明顯低於SLF。鐵蛋白亞基之間的相互作用強度高低與鐵蛋白執行釋放和儲存文摘
文摘
第一章前言1.1固氮酶生物化學研究
1.1.1固氮酶的組成
1.1.2固氮酶的特性
1.1.3固氮酶的多樣性
1.2固氮酶分子生物學研究
1.2.1固氮基因的定位
1.2.2環境因子對nif基因的表達調控
1.3固氮酶晶體學研究
1.3.1固氮酶組分蛋白的結晶研究
1.3.2固氮酶晶體學研究進展
1.4選題的依據及研究思路
第二章材料與方法
2.1棕色固氮菌的培養
2.1.1培養基配製
2.1.2菌體培養
2.1.3菌體生長及活性測定
2.2厭氧技術
2.2.1氬氣的純化
2.2.2厭氧操作要點
2.3固氮酶的分離純化
2.3.1含不同鹽濃度的厭氧Tris-HCl緩衝液的配製
2.3.2固氮酶的分離純化
2.3.3部分缺失P-cluster的△nifE Av1(C)的製備
2.4蛋白質濃度及活性測定
2.4.1濃度測定
2.4.2活性測定
2.5蛋白質電泳及Western-blotting
2.5.1聚丙烯醯胺凝膠電泳
2.5.2 Western-blotting
