共合成酶

共合成酶

共合成酶是指通過化學變化而合成的酶製劑。

簡介

ATP合成酶(ATPsyntherase)廣泛分布於線粒體內膜,葉綠體類囊體,異養菌和光合菌的質膜上,參與氧化磷酸化和光合磷酸化,在跨膜質子動力勢的推動下合成ATP.分子結構由突出於膜外的F1親水頭部和嵌入膜內的F0疏水尾部組成.

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S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)作為所有生物體內的重要中間代謝物,具有良好的臨床套用價值。為了獲得高效合成SAM的重組畢赤酵母,本文構建了AOX1啟動子調控的SAM合成酶表達載體pPIC3.5K-sam和透明顫菌血紅蛋白(VHb)表達載體pPICZA-vgb,轉化畢赤酵母得到了表達SAM合成酶的重組菌GS115/sam,共表達SAM合成酶和VHb的重組菌GS115/sam-vgb。通過搖瓶培養,研究了誘導期甲醇添加濃度對兩株重組菌生長、SAM產量、SAM合成酶比產率及單位菌體SAM含量的影響,結果表明,甲醇濃度由0.8%提高至1.6%、2.4%可提高菌體濃度、SAM產量及單位菌體SAM含量,但導致SAM合成酶活力降低,細胞死亡率增加。而VHb的表達在所考察的三個甲醇濃度下都提高了細胞活性和呼吸強度,促進了胞內ATP的合成,從而促進了細胞生長,最終提高SAM產量。通過增加搖瓶裝液量,發現VHb的表達能在溶氧不足時促進重組菌GS115/sam-vgb生長,提高SAM比產率。針對兩株SAM高產菌在較高甲醇濃度時所表現的生長優勢,以GS115/pPIC3.5K為對照,初步探索了GS115/sam胞內酶促合成SAM對細胞生長的影響。隨著甲醇濃度的提高,兩株重組菌胞內的過氧化氫酶活性均有所下降,胞內丙二醛的含量卻隨之上升;在各種甲醇濃度時(0.8%,1.6%,2.4%),重組菌GS115/sam中SAM的合成都增強了細胞活性,也提高了過氧化氫酶活力,但對胞內丙二醛MDA含量無影響。說明SAM合成可能有助於細胞抵抗氧化脅迫

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