概述
免疫組織化學染色法是指在抗體上結合螢光或可呈色的化學物質，利用免疫學原理中抗原和抗體間專一性的結合反應，檢測細胞或組織中是否有目標抗原的存在，此方式不只可以用來測知抗原的表現量也可觀察抗原所表現的位置。只要是能夠讓抗體結合的物質，也就是具有抗原性的物質包括蛋白質、核酸、多糖、病原體等都可偵測。
免疫組織化學的優勢在於專一性、靈敏度、簡便快速以及成本低廉，所以廣為醫院採用，通常是藉由特定的腫瘤標記來篩選癌症。免疫組織化學染色法對基礎研究及預防和診療上都是相當重要的一個方法。
基本原理
免疫螢光組織化學是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上螢光素，再用這種螢光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體複合物上含有標記的螢光素，螢光素受激發光的照射，由低能態進入高能態，而高能態的電子是不穩定的，以輻射光量子的形式釋放能量後，再回到原來的低能態，這時發出明亮的螢光（黃綠色或桔紅色），利用螢光顯微鏡可以看見螢光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質和定位，以及利用定量技術測定含量。
染色方法
用螢光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法，稱螢光抗體法。用已知的螢光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法，稱螢光抗原法。免疫螢光組織化學分直接法、間接法和補體法。
一、直接法（1） 檢查抗原方法
這是最簡便、快速的方法，用已知特異性抗體與螢光素結合，製成特異性螢光抗體，直接用於細胞或組織抗原的檢查。此法特異性強，常用於腎穿刺，皮膚活檢和病原體檢查，其缺點是一種螢光抗體只能檢查一種抗原，敏感性較差。
（2）檢查抗體方法
將抗原標記上螢光素，用此螢光抗原與細胞或組織內相應抗體反應，而將抗體在原位檢測出來。
（1）檢查抗體（夾心法）方法
此法是先用特異性抗原與細胞或組織內抗體反應，再用此抗原的特異性螢光抗體與結合在細胞內抗體上的抗原相結合，抗原夾在細胞抗體與螢光抗體之間，故稱夾心法。
（2）檢查抗體方法
用已知抗原細胞或組織切片，加上待檢血清，如果血清含有切片中某種抗原的抗體，抗體結合在抗原上，再用間接螢光抗體(抗種屬特異性IgG螢光抗體)與結合在抗原上的抗體反應，在螢光顯微鏡下可見抗原抗體反應部位呈現明亮的特異性螢光。此法是檢驗血清中自身抗體和多種病原體抗體的重要手段。
（3）檢查抗原法
此法是直接法的重要改進，先用特異性抗體與細胞標本反應，隨後用緩衝鹽水洗去未與抗原結合的抗體，再用間接螢光抗體與結合在抗原上的抗體結合，形成抗原-抗體-螢光抗體的複合物。同直接法相比螢光亮度可增強3或4倍。此法除靈敏性高外，它只需要製備一種種屬間接螢光抗體，可以適用於同一種屬產生的多種第一抗體的標記顯示，這是現在最廣泛套用的技術。
（1）直接檢查組織內免疫複合物方法
用抗補體C3螢光抗體直接作用組織切片，與其中結合在抗原抗體複合物上的補體反應，而形成抗原-抗體-補體—抗補體螢光抗體複合物，在螢光顯微鏡下呈現陽性螢光的部位就是免疫複合物上補體存在處，此法常用於腎穿刺組織活檢診斷等。
（2）間接檢查組織內抗原方法
常將新鮮補體與第一抗體混契約時加在抗原標本切片上，經37℃孵育後，如發生抗原抗體反應，補體就結合在此複合物上，再用抗補體螢光抗體與結合的補體反應，形成抗原-抗體-補體—螢光抗體的複合物，此法優點是只需一種螢光抗體可適用於各種不同種屬來源的第一抗體的檢查。
四、雙重免疫螢光組織化學標記方法
在同一組織標本上需要同時檢查兩種抗原時要進行雙重螢光染色，一般均採用直接法，將兩種螢光抗體（如抗A和抗B）以適當比例混合，加在標本上孵育後，按直接法洗去未結合的螢光抗體，抗A抗體用異硫氰酸螢光素標記，發黃綠色螢光；抗B抗體用TMRITC或RB200標記，發紅色螢光，可以明確顯示兩種抗原的定位。
