ssh[抑制性差減雜交]

ssh[抑制性差減雜交]

抑制性差減雜交( suppression subtractive hybridization, SSH),抑制性差減雜交( SSH) 是1996 年由俄國科學院、加州大學舊金山分校和CLONTECH 公司聯合開發的技術。

基本信息

抑制性差減雜交( suppression subtractive hybridization, SSH),抑制性差減雜交( SSH) 是1996 年由俄國科學院、加州大學舊金山分校和CLONTECH 公司聯合開發的技術, 它能夠快速、簡便地分離和鑑定不同細胞系、不同組織或同一細胞系、同一組織在不同條件下的差異表達基因。

SSH 技術的主要原理是以抑制性PCR 為基礎的cDNA 差減雜交。當使用與2 個不同接頭序列互補的引物進行PCR 擴增時, 無差異表達基因的cDNA 由於兩端存在著反向重複序列, 退火過程中容易產生類似髮夾的互補結構, 無法作為模板與引物配對,從而達到選擇性地抑制非目的基因的擴增, 而差異表達基因的cDNA 則可以有效擴增的目的。同時,運用雜交二級動力學原理, 使得在豐度上有差別的單鏈cDNA, 在變性後再復性的過程中達到均一化富集, 從而消除目的基因間的豐度差異。

SSH 技術操作的流程如下: ①分別提取2 種不同細胞( 受試方: Tester; 驅動方: Driver) 的mRNA並反轉錄為cDNA; ②分別用RsaI 酶切割處理後,將Tester cDNA 分為相等的2 份, 並與2 個不同序列的接頭連線; ③將上述加接頭的cDNA 分別與過量的Driver cDNA 混合, 變性後退火雜交; ④兩輪抑制性PCR 擴增與接頭相連的Tester cDNA 分子; ⑤PCR產物克隆純化, 構建差減文庫並對文庫進行篩選、驗證。  

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