ssh[抑制性差減雜交]

基本信息

• 中文名：安全外殼協定
• 英文名：ssh

抑制性差減雜交（ suppression subtractive hybridization， SSH），抑制性差減雜交（ SSH） 是1996 年由俄國科學院、加州大學舊金山分校和CLONTECH 公司聯合開發的技術， 它能夠快速、簡便地分離和鑑定不同細胞系、不同組織或同一細胞系、同一組織在不同條件下的差異表達基因。

SSH 技術的主要原理是以抑制性PCR 為基礎的cDNA 差減雜交。當使用與2 個不同接頭序列互補的引物進行PCR 擴增時， 無差異表達基因的cDNA 由於兩端存在著反向重複序列， 退火過程中容易產生類似髮夾的互補結構， 無法作為模板與引物配對，從而達到選擇性地抑制非目的基因的擴增， 而差異表達基因的cDNA 則可以有效擴增的目的。同時，運用雜交二級動力學原理， 使得在豐度上有差別的單鏈cDNA， 在變性後再復性的過程中達到均一化富集， 從而消除目的基因間的豐度差異。

SSH 技術操作的流程如下： ①分別提取2 種不同細胞（ 受試方： Tester； 驅動方： Driver） 的mRNA並反轉錄為cDNA； ②分別用RsaI 酶切割處理後，將Tester cDNA 分為相等的2 份， 並與2 個不同序列的接頭連線； ③將上述加接頭的cDNA 分別與過量的Driver cDNA 混合， 變性後退火雜交； ④兩輪抑制性PCR 擴增與接頭相連的Tester cDNA 分子； ⑤PCR產物克隆純化， 構建差減文庫並對文庫進行篩選、驗證。