overlap pcr 即重疊pcr。
重疊PCR的套用是非常廣泛的，他的原理其實很簡單：比如說有兩個基因或者說一個啟動子和一個基因，你要將他們連線到一起，我們首先想到的方法當然是藉助於酶切的方法，但有時我們並不一定能構找到合適的酶切位點，或者說我們找到了酶切位點，但這種酶非常特殊或者又很貴，我們可能只用一次，這樣購買酶就變成了一種浪費，難道沒有別的辦法了嗎？當然有，那就是重組PCR技術。舉個例子可能更容易說明。比如兩個基因，一個命名為A，一個命名為B。A的序列為5-atgcatgctagctagaacgctacgctgactaccccctgatc-3，B的序列為5-atgctagtagctagccccccccaggggataattttttaaaacg-3。首先我們要設計引物，假設引物的序列為：
A1:5-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3
A2:5-ggggggctagctactagcatgatcagggggtagtcagcgt-3
B1:5-acgctgactaccccctgatcatgctagtagctagcccccc-3
B2:5-cgttttaaaaaattatcccct-3
我們的目的是將基因A,B通過PCR的方法連線起來，我們可以仔細的觀察上面的引物A2和B1，我們會發現這兩條引物要比另外兩條引物長很多，為什麼會這樣呢？這就是我們在設計引物的時候在A2的3端加入了20個B基因5端的序列，在B1的5端加入了20個A基因3端的序列。我們來看重疊PCR的步驟：
（1）以A1,A2擴增A基因，B1，B2擴增B基因
（2）回收A，B基因
（3）以A，B為共同的模板，A1和B2為引物，擴增A+B，這樣我們就利用重組PCR的方法將A+B拼接起來了。為什麼會擴出A＋B呢？因為我們在設計引物的時候使A，B有了20個互補的鹼基，他們可以經過退火結合在一起，因此可以擴增出A+B.
第三步目前很多人的做法都不同，有的人是先加入模板A，B，dNTP，Buffer，水，然後進行3－5個循環的擴增，然後在加入引物A1和B2以及TAQ酶，這樣做的好處是可以得到特異的擴增，缺點是麻煩。另外一種方法是將引物，雙模板，酶，dntp等所有的反應成分均一起加入PCR管，進行反應，好處是節省時間，不太麻煩。
目前重疊PCR的套用十分廣泛，比如說在基因的定點突變，雖然說現在有很多的突變試劑盒，套用起來也很簡單，但那是需要銀子的；人工合成基因，其實人工合成基因最基本的技術（目前套用最為廣泛的）就是利用重疊PCR的方法；啟動子與目的基因的串連；兩個不同表達盒的連線，大家都知道我們在使用DNA調取或者說擴增基因的時候，往往需要將幾個表達盒串連起來觀察他們的表達效果，但由於絕大多數的DNA中都含有內含子，也就是說幾個外顯子並不是串連在一起的，而要想達到我們的目的，只要套用重疊PCR技術就可以輕鬆完成。
轉自丁香園
