基本信息
書名：RNA研究方法——分離鑑定RNA的實驗指導
語種：英文
標準書號：978-7-03-018228-9
版本：第三版 中文導讀版
開本：16開
責任編輯：
字數：1197千字
書類：理論專著/套用技術
冊/包：3
編輯部：科愛森藍文化傳播
內容簡介
本書作者是公認的RNA實驗領域的專家，是著名的Exon-lntron生物技術培訓中心的創立者。
本書匯集了有關RNA(核糖核酸)的分子生物學和細胞生物學的各種實驗方法，包括分離提取、純化、鑑定、生物活性的檢驗，以及通過對細胞內RNA狀態的分析研究細胞基因的轉錄及其調控等。這一版新增加了大約30%的內容，涵蓋了RNA研究的最新技術，比如RNAi，生物晶片和生物信息技術等；另外對許多常規實驗技術也進行了更新，比如RT-PCR新技術和改良技術，5’和3’RACE、消減PCR技術、以及cDNA的合成等。
該實驗手冊主要收集整理了最新的真核RNA分離及鑑定的相關方法，而對原核轉錄實驗的介紹涉及較少。書中的實驗方法均是經過試驗驗證的最最佳化的方法。全書都是圍繞RNA這一中心問題展開的，每一部分都附有大量清晰的圖片、表格，並且還有習題，可以幫助讀者更有效地學習，也更有利於讀者安排自己的試驗。
雖然本書是一本實驗指導書，所講述的都是具體的RNA研究的實驗方法，但它的讀者絕不僅限於實際從事RNA實驗的工作人員。許多在平時工作中也接觸到RNA的概念，但是沒有條件或很少有機會自己新手進行RNA實驗的人們，比如其他專業的科學工作者、工農業技術人員、中學生物學教師、臨床醫生、科普作家、科學出版物的編輯、大學低年級學生，只要有閱讀英文專業文章的能力，也可以翻閱這本書。這樣能夠補充自己知識的不足，了解分子生物學家們是臬進行研究工作的，也能從中學到科學工作所必需的嚴格認真、實事求是的精神。
目錄
前言
第1章 重訪RNA和細胞生物化學
為什麼研究RNA?
RNA是什麼？
多核苷酸的裝配
RNA的種類
嚴謹度：影響核酸結構的條件
雙鏈分子的種類
參考文獻和推薦閱讀材料
第2章 真核基因的轉錄和組織
轉錄和中心法則
基因組織
RNA聚合酶和轉錄產物
參考文獻
第3章 信使RNA
典型的mRNA分子的拓撲學
在細胞質中的穩定性
調控水平
參考文獻
第4章 難對付的核糖核酸酶
概述
核糖核酸酶活力的去除
核糖核酸酶抑制劑的種類
儀器和試劑的準備
用於控制核酸酶活力的其他試劑
方案：釩基核糖核苷酸絡合物的合成
參考文獻
第5章 分離RNA的策略
概述
純化RNA過程中的目標
裂解緩衝液配方
用含胍的緩衝液分離RNA
胍-酸-酚抽提技術
密度梯度離心
同時分離RNA和DNA
關於試劑盒
其他方法
純化的RNA的短期和長期保存方法
參考文獻
第6章 關於組織的實驗原理
概述
組織培養物還是組織？
勻漿法
各種器官和組織RNA分離的策略
方案：分離組織RNA的LiCl?尿素法
方案：從多脂組織分離RNA
聚核糖體中的mRNA的提純
方案：聚核糖體mRNA的分離
在野外收集樣品
RNA“清洗”法
參考文獻
第7章 帶polyA尾的RNA的分離
概述
加poly(A)尾
利用poly(A)時的注意事項
帶poly(A)尾的分子的選出
Poly(A)+提純用的磁珠技術
Oligo(dT)?纖維素柱層析
不用柱的快速Poly(A)+提純
參考文獻
第8章 RNA製品的質量控制
概述
質控技術1：RNA的電泳圖
質控技術2：紫外分光光度法和光吸收比
質控技術3：樣品支持RT-PCR的能力
質控技術4：Northern分析
質控技術5：樣品支持體外翻譯的能力
參考文獻
第9章 點雜交分析
概述
優缺點
適當的正負對照
實驗結果的局限性
參考文獻
第10章 RNA電泳
概述
核酸的標準化
瓊脂糖凝膠電泳的RNA變性系統
分子量標準
凝膠染色技術
電泳的安全考慮
電泳儀器的維護
第一次跑瓊脂糖電泳：一些提示
參考文獻
第11章 照相紀錄和影像分析
概述
照相紀錄
數字影像分析
推薦閱讀
第12章 Northern分析
概述
濾膜的選擇
處理和濾膜準備
Northern轉移技術
濾膜轉移後的處理
固定化技術
濾膜固定後的處理
參考文獻
第13章 核酸探針技術
概述
探針的分類
選擇標記系統
DNA探針
反義RNA探針
探針的純化
探針的保存
內對照
參考文獻
第14章 核酸雜交的實踐
概述
影響雜交動力學和專一性的因素
雜交溫度
雜交和Northern分析
參考文獻
第15章 檢測的原理
概述
放射自顯影
非同位素方法
數字影像系統
參考文獻
第16章 用抗核酸酶技術定量特定的mRNA
概述
基本方法的研究
探針的選擇
關於最最佳化的建議
潛在的困難
方案1：用S1核酸酶檢驗定量測定轉錄物
方案2：用抗核糖核酸酶檢驗定量測定轉錄物
參考文獻
第17章 核RNA的分析
概述
轉錄速率的檢驗
方案：核失控轉錄檢驗
方案：核失控轉錄檢驗：替代手續
方案：抗核酸酶和脈衝標記轉錄檢驗
RNA聚合酶I、II、III的活力的鑑別
抽提用於穩態分析的核RNA
方案：核RNA的直接抽提
方案：從富含核糖核酸酶的細胞製備核RNA
參考文獻
第18章 cDNA合成
概述
cDNA合成概論
檢查互補DNA合成的效率
連線時的考慮
參考文獻
第19章 逆轉錄PCR
概述
PCR概論
逆轉錄PCR——普遍研究方法
實驗室的設計
引物的設計
最最佳化步驟
PCR產物的分析
逆轉錄PCR質量控制要點
相關的技術4
方案：第1鏈DNA的合成
方案：cDNA的PCR擴增
克隆PCR產物
方案：平端PCR產物的末端加A4
方案：TA克隆的連線反應5
“TOPO”克隆法7
參考文獻7
第20章 定量PCR技術
概述
靈敏度指數
定量研究
內對照
外對照
對照反應的設定方式
負對照的考慮
競爭PCR:關鍵的考慮
競爭PCR:主要步驟
方案：競爭PCR4
影像分析的考慮
競爭PCR常見問題分析
實時PCR
參考文獻
第21章 轉錄物相減方法
概述
基本問題
相減-抑制PCR
非PCR相減
相減方法常見問題分析
參考文獻
第22章 mRNA差異顯示
概述
一般研究
產物的多變：預期什麼
方案：mRNA差異顯示
方案：差異表達的序列的鑑定和選擇
用親和捕獲法回收差異表達的序列
克隆PCR產物
差異表達的證實
下一步的鑑定
差異顯示的套用
mRNA差異顯示中常見問題分析
參考文獻
第23章 基因表達的高通量分析
概述
微陣列是什麼？
微陣列能做什麼？
微陣列不能做什麼？
微陣列分析的主要步驟
參考RNA
套用
參考文獻
第24章 RNA干擾：目的基因的沉默
概述
RNAi的基本名詞
RNAi作用原理
siRNA的有效設計
體外和體內問題
參考文獻
第25章 基因組、轉錄組、蛋白質組和生物信息學
概述
基本名詞
基因組和基因組學
轉錄組和轉錄組學
蛋白質組和蛋白質組學
生物信息學
參考文獻
第26章 RNA一例
典型的實驗？
靈敏度問題
下一步做什麼
到哪兒去求助
尾聲幾粒智慧之珠
附錄A 保持完整而準確的記錄
附錄B 對分子生物學家有用的儲存液
附錄C 酚的製備
酚的飽和
方法1：用Tris飽和
方法2：用水飽和
參考文獻
附錄D 溴乙錠和SYBR綠溶液的棄去
方案1
輔助方案
方案2
方案3
參考文獻
附錄E 用DNase I從RNA樣品中除去DNA
方案
附錄F 用RNase保溫從DNA樣品中除去RNA
方案：從RNase中除去DNase活力
方案：RNA的酶解
參考文獻
附錄G 甲醯胺、甲醛和乙二醛的去離子
附錄H 矽化離心管和玻璃器具
方案
附錄I 離心:分子生物學家的主流工具
離心機的種類
轉頭
套用
差別離心
密度梯度離心——沉降速度
密度梯度離心——密度平衡技術
參考文獻
附錄J 貼壁細胞的胰酶處理方案
方案
附錄K 鹽析法分離高分子DNA
方案
參考文獻
附錄L 從植物組織提取RNA
附錄M 電泳：原理、參數和安全
理論考慮
典型的電泳分離
介質的選擇
瓊脂糖的純度
瓊脂糖的濃度
聚丙烯醯胺的濃度
樣品分子大小的範圍
核酸的構象
外加電壓
溴乙錠
SYBR綠
鹼基組成和溫度
電場方向
膠槽的樣式
電泳的安全考慮
電泳儀器的維護
參考文獻
附錄N 聚丙烯醯胺凝膠電泳
分析用聚丙烯醯胺凝膠電泳
參考文獻
附錄O 儀器和試劑供應商及服務商選登
附錄P 有用的國際單位制單位
附錄Q 常用縮寫
附錄R 商標摘錄
辭彙表
索引
