DuRed(10.000 in Water)同GelRed一樣 代替EB染料DuRed 核酸染料(10,000× 水溶液)DuRed核酸染料特點 ● 無毒性:DuRed 獨特的油性和大分子量特點使其不能穿透細胞膜進入細胞內,艾姆斯氏試驗結果也表明,該染料的誘變性遠遠小於EB。
● 靈敏度高:適用於各種大小片段的電泳染色,對核酸遷移的影響小於SYBR Green I。
● 穩定性高: 適用於使用微波或其它加熱方法製備瓊脂糖凝膠;室溫下在酸或鹼緩衝液中極其穩定,耐光性強。
● 信噪比高:樣品螢光信號強,背景信號低。
● 操作簡單:與 EB 一樣,在預製膠和電泳過程中染料不降解;而電泳後染色過程也只需30 分鐘且無需脫色或沖洗 ,即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。
● 適用範圍廣:可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳後染色(泡染法);適用於瓊脂糖凝膠或聚丙烯醯胺凝膠電泳;可用於 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 與EB有相同的光譜特性,無需改變濾光片及觀察裝置:標準的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用,使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激發。但是DuRed不能被488 nm氬離子雷射器或相似波長的可見光完全激發,因此不推薦使用此類激發裝置的成像系統。對於此類裝置,我們推薦您使用DuGreen(Cat#S1006),它和SYBR Green I的光譜相似,靈敏度相當,但更加穩定。
DuRed使用方法簡介 1.膠染法(用法同EB)(推薦方法)
(1) 制膠時加入DuRed 核酸染料(例如:每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL DuRed 10,000× 儲液,
以此比例類推)。
(2) 按照常規方法進行電泳。
注意事項:
u 此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
u 由於DuRed具有良好的熱穩定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振盪或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將DuRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩衝液中,然後用微波爐或其他常用方式加熱以製備瓊脂糖凝膠。DuRed兼容所有常用的電泳緩衝溶液。
u 如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。如果染色後問題依舊存在,則說明問題與染料無關,請嘗試:降低瓊脂糖濃度;選用更長的凝膠;延長凝膠時間以保證邊緣清晰;改進上樣技巧或選擇泡染法染色。
u 此方法不適合預製聚丙烯醯胺凝膠,對於聚丙烯醯胺凝膠請使用泡染法。
2.泡染法
(1) 按照常規方法進行電泳。
(2) 用H2O將DuRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,製成3× 染色液。(例如將15μL DuRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3) 將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振盪染色30min左右,最佳染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對於含3.5~10%丙烯醯胺的凝膠,染色時間通常介於30min到1h,並隨丙烯醯胺含量增加而延長。
注意事項:
u 用泡染法染色時,染料用量較多。單次使用的染色液可重複使用3次左右。
u 3×DuRed染色液可以大量製備,在室溫下避光保存直至用完。
幾種核酸染料比較
名稱 | 靈敏度 | 穩定性 | 對DNA遷移的影響 | 安全性 | 適用性 |
DuRed | 高 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 是一種獨特的油性大分子,不易揮發升華,不易吸入人體,不能穿透細胞膜進入活體細胞內,安全無毒。 ② 艾姆斯氏測試結果表明,DuRed在凝膠染色濃度下完全沒有誘變性,因此完全沒有致癌毒性。 | 通用大小片段電泳染色,與EB有相同的光譜特性,無需改變濾光片及觀察裝置。標準的EB濾光片或SYBR濾光片都適用,使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在300nm紫外光附近可得到最佳激發。 |
DuGreen | 高 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 是一種獨特的油性大分子,不易揮發升華,不易吸入人體,不能穿透細胞膜進入活體細胞內,安全無毒。 ② 艾姆斯氏測試結果表明,DuGreen在凝膠染色濃度下完全沒有誘變性,因此完全沒有致癌毒性。 | 通用大小片段電泳染色,適用於使用254nm激發的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
SYBR Green I | 高 | 低 | 染料濃度較高時,條帶容易彎曲,DNA片段遷移的現象明顯 | 屬花箐染料,能透過細胞膜進入活體細胞內,但容易生物降解,不會在體內殘留,安全無毒。 | 100bp以上電泳染色,適用於使用254nm激發的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
EB | 低 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 分子量小,易揮發升華,易吸入人體,不易生物降解,在體內長期殘留。 ② 艾姆斯氏測試結果表明,EB容易引起有機體突變,是一種強誘變劑,具有高致癌性。 | 100bp以上電泳染色,背景螢光信號高;使用普通紫外凝膠透射儀觀察。 |
Goldview | 低 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 主要成分為吖啶橙,是一種煤焦油提取物,具有高毒,致癌,高誘變性。 ② 易揮發升華,易吸入人體,能穿透細胞膜進入活體細胞內,不易生物降解,在體內長期殘留。 | 100bp以上電泳染色,背景螢光信號高;適用於使用254nm激發的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
特別提醒:
u 如果您使用的是紫外成像儀,請選擇DuRed;如果您使用雷射成像儀或希望在可見光下觀測,請選擇 DuGreen。
u 在極少數情況下,質粒經某些酶切後的DNA樣品會出現拖尾和解析度降低,此時建議同時嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。
相關產品:
目錄號 | 產品名稱 | 規格 |
S1005 | DuRed 核酸染料(10,000× 水溶液) | 500 μL |
S1006 | DuGreen 核酸染料(10,000× 水溶液) | 500 μL |