圖片
12孔板草圖
使用說明
本發明是一種沙門氏菌微量MPN檢測方法，涉及利用微量培養基培養和鑑別沙門氏菌，並根據MPN方法進行樣品中沙門氏菌快速定量/定性檢測，屬微生物培養與檢測領域。通過改變培養基成份把傳統的MPN檢測方法中的多個實驗單元整合在一起，利用12孔細菌培養板（4個梯度，3個重複）進行增菌、培養、檢測，捨棄了傳統的9管法，可迅速篩選出陽性樣品，極大的減少了工作量，解決了傳統沙門氏菌定量檢測耗時長、工作量大的問題。能簡便地檢測出食品中沙門氏菌的含量，並且當食品中沙門氏菌含量較低時，具有很好的靈敏度。
操作方法
1. 以無菌操作，稱取樣品25g，加入到225mL 一步增菌液中，均質1min～2 min，製成1:10 的樣品稀釋液。
2. 取1ml 1:10 的樣品稀釋液加入到9ml生理鹽水試管中，混勻做成1:100稀釋液，以此法做1:1000稀釋液。
3. 無菌手續取10ml 1:10 的樣品稀釋液加入到3個無菌空試管中，共做3管（每管加入樣品量為1g）；取1ml 1:10 的樣品稀釋液加入到9ml一步增菌液試管中，共做3管（每管加入樣品量為0.1g）；取1ml 1:100 的樣品稀釋液加入到9ml一步增菌液試管中，共做3管（每管加入樣品量為0.01g）；取1ml 1:1000 的雞肉樣品稀釋液加入到9ml一步增菌液試管中，共做3管（每管加入樣品量為0.001g）。這樣共做了4個稀釋度，每個稀釋度有3個重複。
4. 將上述袋子裡剩餘的216ml一步增菌液和12管一步增菌液放入36℃±1℃培養18～20小時。
5. 將袋子裡培養液劃線於XLT4平板上，置於36℃±1℃24小時，做定性；定量用的12管培養液每管取20ul加入到MSRV板子對應孔的左邊，儘量接近培養基，不要戳破，不要沿管壁加。如果MSRV表面水汽大，可以放在36℃或42℃烘乾表面水分再用（最好提前一天從冰櫃中拿出放室溫）。然後將MSRV板子放在42℃±1℃培養24小時觀察結果。
6. MSRV板子孔內培養基變紅且有蔓延生長的為可疑陽性孔，用接種環在蔓延生長的最邊緣取菌劃線XLT4平板，每一個可疑孔劃一塊XLT4平板，置於36±1℃培養24小時觀察結果
7. XLT4平板上有黑心、粉紅色、菌落周圍有透明區域或黑心、黃色菌落或粉紅色無黑心的均為可疑菌落，挑取可疑菌落2～3個接種TSI瓊脂斜面，36±1℃培養24小時，排除全管黃或全管紅的，其餘的均有沙門氏菌的可能性，如果TSI反應一樣的，挑取1株最可疑株進行生化管鑑定（靛基質、pH7.2尿素、KCN試驗和對照、賴氨酸試驗和對照管），典型反應為靛基質-（加試劑後不變紅）、pH7.2尿素-（不變紅）、KCN試驗-（清亮）和對照+（渾濁）、賴氨酸試驗+（紫色）和對照管-（變黃）。
8. 血清學鑑定：生化鑑定為沙門氏菌的取TSI斜面的菌依次進行OMA-OMB-OMC-OMD和HMA-HMB-HMC-HMD凝集，如果前面的血清凝集請在記錄上記下結果，不再進行後面的血清凝集。
12孔板樣圖