範圍
本標準 適用於以順丁烯二酸酐、順/反丁烯二酸為原料經水合反應、濃縮結晶、脫水、乾燥而製得的食品添加劑 DL-蘋果酸。
規範性引用檔案
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化學名稱、分子式、結構式和相對分子質量
化學名稱
DL-羥基丁二酸
分子式
CHO
相對分子質量
134.09 (按 2007 年國際相對原子質量)
技術要求
感官要求：應符合表 1 的規定。
表 1 感官要求
| 項目 | 指標 | 檢驗方法 |
| 色澤 | 白色或類白色 | 取適量實驗室樣品，置於清潔、乾 燥的白瓷盤中，在自然光線下，目 視觀察，嗅其氣味。 |
| 氣味 | 有特殊的酸味 | |
| 組織狀態 | 結晶粉末或顆粒 |
理化指標：應符合表 2 的規定。
表 2 理化指標
| 項目 | 指標 | 檢驗方法 |
| DL-蘋果酸（以 CHO計），w /% | 99.0～100.5 | 附錄中 DL-蘋果酸含量的測定 |
| 比旋光度 αm(25℃,D)/〔( º)·dm· kg〕 | -0.10~+0.10 | 附錄中 比旋光度的測定 |
| 砷（As）/ (mg/kg) ≤ | 2 | 附錄中砷的測定 |
| 鉛（Pb）/ (mg/kg) ≤ | 2 | 附錄中 鉛的測定 |
| 灼燒殘渣，w /% ≤ | 0.1 | 附錄中灼燒殘渣的測定 |
| 富馬酸，w / % ≤ | 1.0 | 附錄中 富馬酸和馬來酸的測定 |
| 馬來酸，w / % ≤ | 0.05 | 附錄中富馬酸和馬來酸的測定 |
| 水不溶物，w / % ≤ | 0.1 | 附錄中水不溶物的測定 |
附 錄
警示
試驗方法規定的一些試驗過程可能導致危險情況。操作者應採取適當的安全和防護措施。
一般規定
除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和GB/T 6682－2008中規定的三級水。
試驗方法中所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、製劑及製品，在沒有註明其他要求時， 均按 GB/T 601、GB/T 602 和 GB/T 603 之規定製備。
鑑別試驗
蘋果酸氨鹽呈色試驗
試劑和材料
氨水溶液：2+3。
對氨基苯磺酸：10g/L。
亞硝酸鈉溶液：200g/L。
氫氧化鈉溶液：40g/L。
分析步驟
稱取 0.5g 實驗室樣品，精確至 0.01g，置於 50mL 試管中，加入 10mL 水溶解。用氨水溶液中和 至中性,加入 1mL 對氨基苯磺酸溶液,在沸水浴中加熱 5min。加入 5mL 亞硝酸鈉溶液，再置於水浴加 熱 3min 後，加入 5mL 氫氧化鈉溶液，試驗溶液應立即呈紅色。
紅外譜圖對照
稱取約 1mg 實驗室樣品及 100mg 溴化鉀，研成均勻粉末，放入成形器中，壓成薄片後用紅外光 譜儀測定其吸收光譜，其譜圖與附錄 B 圖 B.1 給出的 DL-蘋果酸紅外標準譜圖一致。
DL-蘋果酸含量的測定
方法提要
以酚酞為指示劑，用氫氧化鈉標準溶液滴定樣品水溶液，根據氫氧化鈉標準滴定溶液的用量,計 算以 C4H6O5計的總酸含量為 DL-蘋果酸含量。
試劑和材料
氫氧化鈉標淮滴定溶液：c (NaOH)=1.0mol/L。
酚酞指示液：10g/L。
分析步驟
1 稱取2.0g實驗室樣品，精確至0.0002 g，加40mL無二氧化碳的水溶解，加2滴酚酞指示液， 用氫氧化鈉標準溶液滴定至微紅色，保持30s不褪色為終點。
2 在測定的同時，按與測定相同的步驟，對不加試料而使用相同數量的試劑溶液做空白試驗。
食品添加劑：DL 蘋果酸結果計算 DL-蘋果酸（以 CHO計）的質量分數 w1，數值以%表示，按公式計算：
式中：
V ——試料消耗氫氧化鈉標準滴定溶液(A.4.2.1)體積的數值,單位為毫升(mL)；
V0 ——空白試驗消耗氫氧化鈉標準滴定溶液(A.4.2.1)體積的數值,單位為毫升(mL)；
c ——氫氧化鈉標準滴定溶液濃度的準確數值,單位為摩爾每升(mol/L)；
m ——試料質量的數值,單位為克(g)；
M ——蘋果酸（1/2 CHO）的摩爾質量的數值,單位為克每摩爾(g/ mol)(M =67.04)。
取兩次平行測定結果的算術平均值為報告結果。兩次平行測定結果的絕對差值不大於0.2%。
比旋光度的測定
稱取4.25g實驗室樣品，精確至0.001g，加入20mL水溶解，移至50mL容量瓶中，用水稀釋至 刻度，搖勻。測定溫度為（25±0.5）℃。
食品添加劑：DL 蘋果酸比旋光度 αm(25 ,D) ℃ 數值以“( º)·dm · kg ”表示，按公式計算：
式中：
α —— 測得的旋光角,單位為度(°)；
l —— 旋光管的長度,單位為分米(dm)；
ρα—— 溶液中有效組分的質量濃度,單位為克每毫升(g/mL)。
其他按GB/T 613進行。
砷的測定
稱取1.0g實驗室樣品，精確至0.01g，放入測砷裝置錐形瓶中，加入5mL水溶解，加入1滴溴 酚藍指示液（0.4g/L），滴加氨水溶液（1+4）中和至溶液呈紫色，補水至約35mL，再加入20mL硫酸 溶液（1+5），搖勻，作為試樣溶液。使用吸收液B。進行限量試驗，量取（2±0.02）mL砷（As）標 準溶液（相當於2.0μg As）製備限量標準溶液。
其他按GB/T 5009.76二乙氨基二硫代甲酸銀比色法進行。
鉛的測定
比色法（仲裁法） 按GB/T 5009.75進行。試樣處理按乾法消解法進行。臨用前，將1mg/mL的鉛（Pb）標準溶液稀 釋成5μg/mL的鉛（Pb）標準溶液。測定時量取（25±0.02）mL試樣溶液（相當於2.5g實驗室樣品）和 （1±0.02）mL鉛（Pb）標準溶液（相當於5μg Pb），分別置於125mL分液漏斗中，鉛標準溶液中加1% 硝酸溶液至25mL。
原子吸收光譜法 試樣處理按 GB/T 5009.75 乾法消解法進行。其他按 GB 5009.12 進行。
灼燒殘渣的測定
稱取約 2g 實驗室樣品，精確至 0.0001g。灼燒溫度為(800±25)℃。其他按 GB/T 9741 進行。 取兩次平行測定結果的算術平均值為報告結果。兩次平行測定結果的絕對差值不大於 0.01%。
富馬酸和馬來酸的測定
方法提要
用高效液相色譜法，在選定的工作條件下，通過色譜柱使樣品溶液中各組分分離，用紫外吸收 檢測器檢測，用外標法定量，計算樣品中富馬酸及馬來酸的含量。
試劑和材料
富馬酸：質量分數≥99.0%。
馬來酸：質量分數≥99.0%。
氫氧化鈉溶液：20g/L。
磷酸溶液：量取磷酸（優級純）(1±0.02)mL於1000mL容量瓶中，加入100mL甲醇（HPLC 級，可根據柱效調整加入量），加水稀釋至刻度，再經0.45μm濾膜過濾。
儀器和設備
高效液相色譜系統(HPLC) A.9.3.1.1 高壓泵：無脈衝，能將流速保持在0.1mL/min～10.0 mL/min。
定量環：5μL。
紫外光檢測器：可變波長。
數據處理系統：色譜工作站或數據處理機。
抽濾系統 抽濾系統使用孔徑為 0.45μm 的纖維素酯膜濾紙（用於流動相的預處理） 。
過濾系統 過濾系統使用孔徑為 0.45μm 的纖維素酯膜濾紙（用於樣品的預處理）。
進樣器 自動進樣器或微量進樣器，50μL或100μL。
色譜分析條件
推薦的色譜柱及典型色譜操作條件見表3，其他能達到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用。
表3 色譜柱和典型色譜操作條件
| 色譜柱 | 柱長 250mm，柱內徑 4.6mm ，以矽膠為基質,表面鍵合 C8 官能團的非極性填料色譜柱 |
| 柱溫 | 15℃～60℃，控制精度±1℃ |
| 流動相 | 磷酸溶液 |
| 流動速度/( mL/min) | 1.0 |
| 檢測器檢測波長/nm | 214 |
| 進樣量/μL | 5 |
分析步驟
標準樣品溶液的製備
富馬酸標準樣品溶液的製備
稱取 50mg 富馬酸，精確至 0.0002g,溶於適量水（必要時加入少量氫氧化鈉溶液），轉移至 50mL 容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度。 移取上述溶液（1±0.02)mL ,置於 50mL 容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經 0.45μm 濾膜 過濾，再經超音波脫氣處理。
馬來酸標準樣品溶液的製備
稱取 50mg 馬來酸，精確至 0.0002g,溶於適量水（必要時加入少量氫氧化鈉溶液），轉移至 250mL 容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度。 移取上述溶液（1±0.02)mL ,置於 100mL 容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經 0.45μm 濾 膜過濾，再經超音波脫氣處理。
樣品溶液的製備
稱取 0.2 g 實驗室樣品，精確至 0.0002g, 置於 50mL 容量瓶，以流動相稀釋至刻度，搖勻，經 0.45μm 濾膜過濾，再經超音波脫氣處理。
測定
按高效液相色譜操作規程開機預熱,調節溫度及流量,達到分析條件並基線平穩後,將標準樣品溶 液進樣。
用微量進樣器取標準樣品溶液 5μL，進樣（或自動進樣）,記錄所得的富馬酸或馬來酸的峰面積 A2。
用微量進樣器取樣品溶液 5μL，進樣（或自動進樣）,記錄所得的待測物質的峰面積 A1。
結果計算
食品添加劑：DL 蘋果酸富馬酸或馬來酸的質量分數 w2，數值以%表示，按公式計算：
式中：
A1 —— 樣品液中待測物質的峰面積；
A2 —— 標準樣品溶液中富馬酸或馬來酸的峰面積；
m2 —— 標準樣品溶液中富馬酸或馬來酸的進樣量，單位為微克(μg)；
m —— 樣品的進樣量,單位為微克(μg)。
水不溶物的測定
分析步驟
稱取 25.0g 實驗室樣品，精確到 0.1g，溶於 100mL 水中，以乾燥至質量恆定的坩堝式耐酸濾過 漏斗過濾後，以熱水洗滌漏斗，置於 100℃烘箱中乾燥至恆重，冷卻稱量。
結果計算
食品添加劑：DL 蘋果酸水不溶物的質量分數 w3，數值以%表示，按公式計算：
式中：
m1 —— 濾渣質量的數值，單位為克(g)；
m —— 試料質量的數值，單位為克(g)。
