前 言
本標準代替GB/T21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測定》和SN/T3147—2012《出口食品中鄰苯二甲酸酯的測定》。
本標準與GB/T21911—2008相比,主要變化如下:
———標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中鄰苯二甲酸酯的測定”;
———增加了鄰苯二甲酸二烯丙酯和鄰苯二甲酸二異壬酯兩種目標化合物;
———增加了同位素內標法定量作為第一法;
———修改了前處理方法;
———修改了方法的檢出限。
範圍
本標準第一法規定了食品中16種鄰苯二甲酸酯類物質含量的氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)的測定方法;第二法規定了食品中18種鄰苯二甲酸酯類物質含量的氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)的測定方法。
本標準第一法適用於食品中鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)、鄰苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二苯酯(DPhP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)含量的內標法測定和確證;第二法適用於食品中鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二烯丙酯(DAP)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)、鄰苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二苯酯(DPhP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)含量的外標法測定和確證。
氣相色譜-質譜法同位素內標法
原理
在試樣中加入氘代的鄰苯二甲酸酯作為內標,各類食品經提取、淨化後經氣相色譜-質譜聯用儀進行測定。採用特徵選擇離子監測掃描模式(SIM),以保留時間和定性離子碎片的豐度比定性,同位素內標法定量。
試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為色譜純,水為GB/T6682規定的二級水。
試劑
正己烷(C6H14)。
乙腈(C2H3N)。
丙酮(CH3COCH3)。
二氯甲烷(CH2Cl2)。
標準品
種鄰苯二甲酸酯類標準品
鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)、鄰苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)、鄰苯二甲酸二苯酯(DPhP),混合液體標準品,濃度為1000μg/mL,標準品信息、純度見附錄A。
種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內標
D4-鄰苯二甲酸二甲酯(D4-DMP)、D4-鄰苯二甲酸二乙酯(D4-DEP)、D4-鄰苯二甲酸二異丁酯(D4-DIBP)、D4-鄰苯二甲酸二正丁酯(D4-DBP)、D4-鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(D4-DMEP)、D4-鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(D4-BMPP)、D4-鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(D4-DEEP)、D4-鄰苯二甲酸二戊酯(D4-DPP)、D4-鄰苯二甲酸二己酯(D4-DHXP)、D4-鄰苯二甲酸丁基苄基酯(D4-BBP)、D4-鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(D4-DBEP)、D4-鄰苯二甲酸二環己酯(D4-DCHP)、D4-鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(D4-DEHP)、D4-鄰苯二甲酸二苯酯(D4-DPhP)、D4-鄰苯二甲酸二正辛酯(D4-DNOP)、D4-鄰苯二甲酸二壬酯(D4-DNP):純度>99%。
標準溶液配製
16種鄰苯二甲酸酯標準中間溶液(10μg/mL):準確移取鄰苯二甲酸酯標準品(1000μg/mL)1mL至100mL容量瓶中,用正己烷準確定容至刻度。
16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內標溶液(100μg/mL):準確稱取16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內標各0.01g(精確到0.0001g)於100mL容量瓶中,用正己烷溶解並準確定容至刻度。
16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內標的標準使用液(10μg/mL):準確移取16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內標(100μg/mL)10mL於100mL容量瓶中,加入正己烷並準確定容至刻度。
16種鄰苯二甲酸酯標準系列工作液:準確吸取16種鄰苯二甲酸酯標準中間溶液(10μg/mL),用正己烷逐級稀釋,配製成濃度為0.00μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL的標準系列溶液,同時加入內標使用液(10μg/mL),使內標濃度均為0.125μg/mL,臨用時配製。
儀器和設備
注:所用玻璃器皿洗淨後,用重蒸水淋洗3次,丙酮浸泡lh,在200℃下烘烤2h,冷卻至室溫備用。
氣相色譜-質譜聯用儀(GC-MS)。
分析天平:精度0.0001g。
氮吹儀。
渦旋振盪器。
超音波發生器。
離心機:轉速≥4000r/min。
粉碎機。
固相萃取(SPE)裝置。
固相萃取柱:PSA/Silica複合填料玻璃柱(1000mg,6mL)。
分析步驟
試樣製備
液態樣品:取約200mL樣品混勻後放置磨口玻璃瓶內待用。
半固態和固態樣品:分別取約200g樣品經粉碎後放置磨口玻璃瓶內待用。
試樣處理
液態試樣
液態試樣A:液體乳、飲料、醬油、食醋、白酒、蜂蜜等。準確稱取試樣1.0g(精確至0.0001g)於25mL具塞磨口離心管中,加入125μL同位素內標使用液,加入2mL~5mL蒸餾水,渦旋混勻,再準確加入10mL正己烷,渦旋1min,劇烈振搖1min,超聲提取30min,1000r/min離心5min,取上清液,供GC-MS分析。
液態試樣B:植物油等。液態油脂混勻後準確稱取0.5g(精確至0.0001g)於10mL具塞磨口離心管中,加入25μL同位素內標使用液,依次加入100μL正己烷和2mL乙腈,渦旋1min,超聲提取20min,4000r/min離心5min,收集上清液。殘渣中加入2mL乙腈,渦旋1min,4000r/min離心5min。再加入2mL乙腈重複提取1次,合併3次上清液,待SPE淨化。
半固態試樣
半固態試樣A:果凍、甜麵醬等。準確稱取混勻試樣0.5g(精確至0.0001g)於25mL具塞磨口離心管中,加入125μL同位素內標使用液,加入2mL~5mL蒸餾水,渦旋混勻,再準確加入10mL正己烷,渦旋1min,劇烈振搖1min,超聲提取30min,1000r/min離心5min,取上清液,供GC-MS分析。
半固態試樣B:芝麻醬、含油調味醬等。將樣品充分粉碎混勻後準確稱取0.5g(精確至0.0001g)於10mL具塞磨口離心管中,加入25μL同位素內標使用液,加入1mL正己烷,渦旋2min,再加入5mL乙腈,渦旋1min,超聲提取20min,4000r/min離心5min,收集上清液。加入5mL乙腈重複提取1次,合併上清液。40 ℃氮氣吹乾,加入6mL乙腈,渦旋混勻,待SPE淨化。
固態試樣
固態試樣A:乳粉、米粉、雞精、味素、乾酪、糖果、花粉、肉製品、糕點、速食麵、果蔬及其製品等。準確稱取混勻試樣0.5g(精確至0.0001g)於25mL具塞磨口離心管中,加入125μL同位素內標使用液,加入2mL~5mL蒸餾水,渦旋混勻,再準確加入10mL正己烷,渦旋1min,劇烈振搖1min,超聲提取30min,1000r/min離心5min,取上清液,供GC-MS分析。
固態試樣B:黃油等。將樣品充分粉碎混勻後準確稱取0.5g(精確至0.0001g)於10mL具塞磨口離心管中,加入25μL同位素內標使用液,加入1mL正己烷,渦旋2min,再加入5mL乙腈,渦旋1min,超聲提取20min,4000r/min離心5min,收集上清液。加入5mL乙腈重複提取1次,合併上清液。40 ℃氮氣吹至近乾,加入6mL乙腈,渦旋混勻,待SPE淨化。
注:黃油應融化為液態油脂混勻後稱取,並在提取過程中保持液態。
SPE淨化
依次加入5mL二氯甲烷、5mL乙腈活化,棄去流出液;將待淨化液加入SPE小柱,收集流出液;再加入5mL乙腈,收集流出液,合併兩次收集的流出液,加入1mL丙酮,40℃氮吹至近乾,正己烷準確定容至2mL,渦旋混勻,供GC-MS分析。
空白試驗
除不加試樣外,均按上述測定步驟進行。
注:整個操作過程中,應避免接觸塑膠製品。
儀器參考條件
氣相色譜參考條件
色譜柱:5% 苯基-甲基聚矽氧烷石英毛細管色譜柱,柱長:30 m,內徑:0.25 mm,膜厚:0.25μm,或性能相當者。
進樣口溫度:260℃。
程式升溫:初始柱溫60 ℃,保持1 min;以20 ℃/min 升溫至220 ℃,保持1 min;再以5℃/min升溫至250℃,保持1min;再以20℃/min升溫至290℃,保持7.5min。
載氣:高純氦(純度>99.999%),流速:1.0mL/min。
進樣方式:不分流進樣。
進樣量:1μL。
質譜參考條件
電離方式:電子轟擊電離源(EI);
電離能量:70eV;
傳輸線溫度:280℃;
離子源溫度:230℃;
監測方式:選擇離子掃描(SIM),監測離子見附錄B。
溶劑延遲:7min。
標準曲線的製作
將標準系列工作液分別注入氣相色譜-質譜聯用儀中,以鄰苯二甲酸酯各組分及其對應氘代同位素內標的峰面積比值為縱坐標,以系列標準溶液中各組分含量(μg/mL)與對應氘代同位素內標含量(μg/mL)比值為橫坐標,繪製標準曲線。
試樣溶液的測定
將試樣溶液注入氣相色譜-質譜聯用儀中,由試樣中鄰苯二甲酸酯各組分及其內標峰面積比值進行定量計算,得出試樣溶液中各組分含量(μg/mL)與對應氘代同位素內標含量(μg/mL)比值。再根據試樣中加入的對應氘代同位素內標含量(μg/mL)計算試樣溶液中鄰苯二甲酸酯各組分含量(μg/mL)。
定性確認
在上述儀器條件下,試樣待測液和鄰苯二甲酸酯標準品的目標化合物在相同保留時間處(±0.5%)出現,並且對應質譜碎片離子的質荷比與標準品的質譜圖一致,其豐度比與標準品相比應符合表1,可定性目標化合物。
| 相對豐度(基峰) | >50% | >20%~50% | >10%~20% | ≤10% |
| GC-MS相對離子 豐度最大允許誤差 | ±10% | ±15% | ±20% | ±50% |
鄰苯二甲酸酯的總離子流色譜圖見附錄C。
分析結果的表述
試樣中鄰苯二甲酸酯的含量按式(1)計算:
食品中鄰苯二甲酸酯的測定……………………(1)
式中:
X ———試樣中鄰苯二甲酸酯的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
ρ ———從標準工作曲線上查出的試樣溶液中鄰苯二甲酸酯的質量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V ———試樣定容體積,單位為毫升(mL);
m ———試樣的質量,單位為克(g);
1000 ———換算係數。
計算結果應扣除空白值。結果大於等於1.0mg/kg時,保留三位有效數字;結果小於1.0mg/kg時,保留兩位有效數字。
精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
其他
本方法的定量限為:鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)定量限為0.3mg/kg,除DBP外其他15種鄰苯二甲酸酯定量限均為0.5mg/kg。
氣相色譜-質譜法 外標法
原理
各類食品提取、淨化後採用氣相色譜-質譜法測定。採用特徵選擇離子監測掃描模式(SIM),以保留時間和定性離子碎片豐度比定性,外標法定量。
試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為色譜純,水為GB/T6682規定的二級水。
試劑
同上一方法。
標準品
16種鄰苯二甲酸酯類標準品:同上一方法。
鄰苯二甲酸二烯丙酯(DAP):標準品信息、純度參見附錄A。
鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP):標準品信息、純度參見附錄A。
標準溶液配製
鄰苯二甲酸二烯丙酯標準儲備液(1000μg/mL):準確稱取鄰苯二甲酸二烯丙酯0.025g(精確到0.0001g)於25mL容量瓶中,用正己烷溶解並準確配製成質量濃度為1000μg/mL的標準儲備液。
鄰苯二甲酸二異壬酯標準儲備液(1000μg/mL):準確稱取鄰苯二甲酸二異壬酯0.025g(精確到0.0001g)於25mL容量瓶中,用正己烷溶解並準確配製成質量濃度為1000μg/mL的標準儲備液。
17 種鄰苯二甲酸酯標準中間液(10μg/mL):分別準確移取16 種鄰苯二甲酸酯標準品(1000μg/mL)和鄰苯二甲酸二烯丙酯標準儲備液(1000μg/mL)各1mL至100mL容量瓶中加入正己烷並準確定容至刻度。
17種鄰苯二甲酸酯標準系列工作液:準確吸取17種鄰苯二甲酸酯標準中間溶液(10μg/mL),用正己烷逐級稀釋,配製成濃度為0.0μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL的標準系列溶液,臨用時配製。
鄰苯二甲酸二異壬酯標準系列工作液:準確吸取鄰苯二甲酸二異壬酯標準儲備液(1000μg/mL),用正己烷逐級稀釋,配製成濃度為0.0μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的標準系列溶液,臨用時配製。
儀器和設備
同上一方法。
分析步驟
試樣製備
同上一方法。
試樣處理
除不加同位素內標外,均按上一方法測定步驟進行。
SPE淨化
同上一方法。
空白試驗
除不加試樣外,均按上一方法測定步驟進行。
儀器參考條件
除掃描方式外同上一方法。
掃描方式:選擇離子掃描(SIM),監測離子參見附錄D。
標準曲線的製作
將標準系列工作液分別注入氣相色譜-質譜聯用儀中,測定相應的鄰苯二甲酸酯的色譜峰面積,以標準工作液的質量濃度為橫坐標,以相應的峰面積為縱坐標,繪製標準曲線。鄰苯二甲酸二異壬酯的標準系列工作液單獨進樣測定。
試樣溶液的測定
將試樣溶液注入氣相色譜-質譜聯用儀中,得到相應的鄰苯二甲酸酯的峰面積,根據標準曲線得到待測液中鄰苯二甲酸酯的濃度。
定性確認
在上一方法 儀器條件下,試樣待測液和鄰苯二甲酸酯標準品的目標化合物在相同保留時間處(±0.5%)出現,並且對應質譜碎片離子的質荷比與標準品的質譜圖一致,可定性目標化合物。
鄰苯二甲酸酯的總離子流色譜圖見附錄E。
分析結果的表述
試樣中鄰苯二甲酸酯的含量按式(2)計算:
食品中鄰苯二甲酸酯的測定……………………(2)
式中:
X ———試樣中鄰苯二甲酸酯的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
ρ ———從標準工作曲線上查出的試樣溶液中鄰苯二甲酸酯的質量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V ———試樣定容體積,單位為毫升(mL);
m ———試樣的質量,單位為克(g);
1000———換算係數。
計算結果應扣除空白值。結果大於等於1.0mg/kg時,保留三位有效數字;結果小於1.0mg/kg時,保留兩位有效數字。
精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
其他
本方法的定量限為:鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP)的定量限為9.0mg/kg,鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)定量限為0.3mg/kg,除DINP和DBP外其他16種目標化合物定量限均為0.5mg/kg。
附 錄 A
常用的鄰苯二甲酸酯類增塑劑信息表
18種常用的鄰苯二甲酸酯類增塑劑名稱、縮寫、CAS號、分子式、純度見表A.1。
表A.1 18種常用的鄰苯二甲酸酯類增塑劑同位素內標法中鄰苯二甲酸酯監測離子參數
同位素內標法中16種D4-鄰苯二甲酸酯的保留時間、定性和定量離子參數見表B.1。
表B.1D4-鄰苯二甲酸酯的保留時間、定性和定量離子同位素內標法中16種鄰苯二甲酸酯的保留時間、定性和定量離子參數見表B.2。
表B.2 鄰苯二甲酸酯的保留時間、定性和定量離子
表B.2續 鄰苯二甲酸酯的保留時間、定性和定量離子