操作步驟
1. (選做)製備樣品:
1) 血漿、血清樣品:血漿、血清按照常規方法製備,可以直接用於本試劑盒的測定,-20℃凍存,用於Ca的檢測。
2) 細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行勻漿,低速離心取上清,-20℃凍存,用於Ca的檢測。
3) 高濃度樣品:如果樣品中含有較高濃度的Ca,可以使用ddHO稀釋,不宜使用普通蒸餾水稀釋。
4) (選做)樣品準備完畢後可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便於後續計算單位蛋白重量組織或細胞內的Ca含量。
2. Ca檢測:選用經稀鹽酸處理及去離子水清潔的乾燥試管或者一次性無菌聚乙烯離心管,按表1操作。
加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
ddHO | 0.025 | — | — |
鈣標準(2.5mmol/L) | — | 0.025 | — |
待測樣品 | — | — | 0.025 |
Ca顯色工作液 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
3. 混勻,室溫靜置,分光光度計575nm處檢測,比色杯光徑1.0cm,以空白管調零,讀取各管吸光度。
計算
血清、血漿中鈣計算公式:鈣(mmol/L)=(A/A)×2.5
組織中鈣計算公式:鈣(mmol/mg)=(A/A) ×2.5/待測樣品蛋白濃度(mg/L)
參考區間
健康成年人血清鈣濃度:2.1-2.6mmo/L
兒童血清鈣濃度:2.25-2.67mmo/L
臨床意義
增高:見於骨腫瘤,甲狀旁腺機能亢進,急性骨萎縮,腎上腺皮脂功能減退及維生素D攝入過量等。
降低:常見於維生素D缺乏,佝樓病,軟骨病,小兒手足抽搐症,老年骨質疏鬆,甲狀旁腺功能減退,慢性腎炎,尿毒症,低鈣飲食及吸收不良。
注意事項
1. 溶血樣本對檢測有干擾,儘量避免採用溶血樣本。
2. OCPC顯色液偶爾會結晶析出,所以配製成的顯色工作液有時略有析出,可取上清液使用。
3. 該試劑盒對鈣離子敏感度較高,測定器皿一定要乾淨,最好使用一次性聚乙烯塑膠的器皿。
4. 可用血清或肝素抗凝血漿樣本,不宜採用鈣螯合劑及草酸鹽做抗凝劑的樣本。
5. 膽紅素可產生負干擾,含有較高膽紅素的樣本可用血清對照消除該干擾。
6. 本法能夠用於自動生化分析儀終點檢測法。
7. 如果樣品濃度過高,套用蒸餾水稀釋後重測,結果乘以稀釋倍數。
參考文獻
[1]張海悅,魏瀅,李雪,孫景春,王姝. 血液透析液中鈣離子快速檢測試劑盒的研製與套用[J],醫療裝備,2018,9,31(7):52-55.
[2] 李國紅,吳瑛. 透析液鈣濃度對血液透析病人血壓的影響[J], 全科護理,2014,12(15):1398-1399.